紅細胞裂解液(RBC Lysis Buffer,10×)

【紅細胞裂解液(RBC Lysis Buffer,10×)】信息簡介

【信息說明】

產(chǎn)品名稱：紅細胞裂解液(RBC Lysis Buffer,10×)

規(guī)格：100ml/500ml

供應(yīng)商：遠慕生化試劑廠家

分類：細胞組分分離

儲存條件：4℃,12個月

用途：去除細胞懸液中的紅細胞,屬于溶解紅細胞方法的一種

主要成分：無菌溶液；主要由10mM PBS、氯化鈉、氯化鉀等組成。經(jīng)高壓滅菌處理。

【操作步驟】

注意：絕大多數(shù)情況下，應(yīng)使用無菌去離子水稀釋RBC Lysis Buffer(10×)至1×使用，流式細胞術(shù)除外。

A、組織細胞樣本的常規(guī)操作

1、制備細胞懸液: 新鮮組織經(jīng)過胰蛋白酶或膠原酶等消化處理，通過適當方法制備成細胞懸液，離心棄上清。

2、裂解: 加入1×RBC Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解1～2min。 3、離心，棄紅色上清。本步驟亦可在室溫下操作。

4、如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不完全，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3各一次。

5、洗滌：根據(jù)實驗要求加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻重懸沉淀。4℃離心，棄上清，該離心步驟亦可在室溫下操作。

B、組織細胞樣本的快速操作(無需洗滌)

1、制備細胞懸液：新鮮組織經(jīng)胰蛋白酶或膠原酶等消化處理，制備細胞懸液，離心棄上清。

2、裂解：加入細胞5倍細胞沉淀體積的1×RBC Lysis Buffer，輕柔吹打混勻裂解。

3、加入PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻。

4、離心5min，棄紅色上清，本離心步驟亦可在室溫下操作。

5、如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不完全，可以重復(fù)上述步驟2～4各一次。

6、根據(jù)實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀，進行計數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。

C、血液樣本的常規(guī)操作

1、取新鮮抗凝血，離心，棄上清。

2、 裂解：加入1×RBC Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解1～5min。本操作步驟在4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。

3、離心：棄紅色上清。本步驟亦可在室溫下操作。

4、如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不完全，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。

5、洗滌： 根據(jù)實驗要求加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻重懸沉淀；4℃離心，棄上清，該離心步驟亦可在室溫下操作。

6、根據(jù)實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀，進行計數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。

D、血液樣本的快速操作(無需洗滌)

1、新鮮抗凝血中加入10倍體積的1×RBC Lysis Buffer，輕輕吹打混勻，裂解4～15min。本操作步驟在4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。

2、加入 PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻。

3、離心，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。

4、如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不完全，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。

5、根據(jù)實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀，進行計數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。

紅細胞裂解液(RBC Lysis Buffer,10×)

【注意事項】

1、制備細胞懸液時應(yīng)根據(jù)實驗需要，不一定要制備成單細胞懸液。

2、后續(xù)試驗如果是用于細胞培養(yǎng)，操作過程中應(yīng)注意無菌操作，盡量在超凈工作臺內(nèi)操作。

3、離心步驟盡量在4℃離心機上操作。

4、常規(guī)步驟與快速步驟的區(qū)別在于：常規(guī)步驟多了一步洗滌過程的離心，可以節(jié)省洗滌液的用量，并且洗滌效果也更好，不需要大體積的離心管;快速步驟少了一次離心過程，洗滌效果略差一些，同時需要大體積的離心管。

5、離心洗滌后，通常極微量的紅細胞不會影響后續(xù)的檢測。

6、如果經(jīng)過1×RBC Lysis Buffer處理后的樣品后續(xù)用于總RNA的提取，在處理細胞時不必使用DEPC處理的溶液，即無需在該操作中特意去除RNase。

7、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

【簡介說明】

去除紅細胞的方法有多種，如ACK Lysis Buffer、Tris-氯化銨紅細胞裂解液、Gey's Lysis Buffer。紅細胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer)是一種從人、鼠或其他哺乳動物等體內(nèi)的組織樣品或血液中裂解并去除無核紅細胞的溶液，其主要有效成分為NH4Cl。 RBC Lysis Buffer(10×)配方經(jīng)過優(yōu)化不同于ACK Lysis Buffer，在裂解無核紅細胞的同時幾乎不損傷淋巴細胞(Lymphocyte)或其它有細胞核的細胞。該裂解液經(jīng)過濾除菌，為10×的濃縮液，使用1×RBC Lysis Buffer處理過的血液或組織細胞樣品可以用于后續(xù)的細胞培養(yǎng)、細胞融合以及核酸或蛋白的提取及各種常規(guī)的分析和檢測，尤其適用于流式細胞檢測或需要高濃度裂解液的情況。

標簽：紅細胞裂解液(RBC Lysis Buffer,10×)

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