![雙[三(羥甲基)氨基甲烷],CAS:6976-37-0](http://struc.chem960.com/strucimg/7000/ctzw0nzi34oyob9fnlmhiwee.png)
上海遠(yuǎn)慕生物專業(yè)供應(yīng)G418溶液(geneticin,20mg/ml)，氨芐青霉素溶液(Ampicillin,50mg/ml)，氨芐青霉素溶液(Ampicillin,100mg/ml)，潮霉素B溶液(Hygromycin B,50mg/ml)，潮霉素B溶液(Hygromycin B,50mg/ml)等不系列抗生素產(chǎn)品，詳細(xì)介紹相關(guān)的用途，操作步驟，注意事項(xiàng)等詳情，本司現(xiàn)貨供應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品對照品，動物血清血漿，細(xì)胞培養(yǎng)，抗體，培養(yǎng)基，化學(xué)試劑，生化試劑，染色液，緩沖液，液體試劑，按氨基酸，蛋白質(zhì)，酶，多肽，實(shí)驗(yàn)耗材，進(jìn)口試劑，國產(chǎn)試劑，其他實(shí)驗(yàn)試劑等，品種滿足于科研實(shí)驗(yàn)的需求，了解更多產(chǎn)品詳情請來電聯(lián)系我司銷售人員！
產(chǎn)品名稱：G418溶液(geneticin,20mg/ml)
規(guī)格：10ml
分類：抗生素
儲存條件：—20℃,避光,6個月
用途：又稱遺傳霉素,新霉素,對細(xì)菌、酵母、高等植物、原生生物、哺乳動物細(xì)胞具有氨基苷類毒性,對真核細(xì)胞進(jìn)行篩選。
注意事項(xiàng)：無菌溶液。pH7.2-7.9,經(jīng),一般工作濃度為50-1000ug/ml。
儲存條件:—20℃,避光,6個月
主要成分：主要由G418、HEPES等組成，過濾除菌。
產(chǎn)品名稱：G418溶液(geneticin,20mg/ml)
規(guī)格：10ml
分類：抗生素
儲存條件：—20℃,避光,6個月
用途：又稱遺傳霉素,新霉素,對細(xì)菌、酵母、高等植物、原生生物、哺乳動物細(xì)胞具有氨基苷類毒性,對真核細(xì)胞進(jìn)行篩選。
注意事項(xiàng)：無菌溶液。pH7.2-7.9,經(jīng),一般工作濃度為50-1000ug/ml。
儲存條件:—20℃,避光,6個月
主要成分：主要由G418、HEPES等組成，過濾除菌。
G418溶液(geneticin, G418)又稱遺傳霉素，是一種氨基糖苷類抗生素, 是細(xì)胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染最常用的抗性篩選試劑。G418能阻斷蛋白質(zhì)合成，對細(xì)菌、酵母、高等植物以及哺乳動物細(xì)胞均具有氨基糖苷類毒性，用于真核細(xì)胞從轉(zhuǎn)座子Tn5和Tn601穩(wěn)定轉(zhuǎn)染新霉素(neo)抗性基因的選擇和維持。經(jīng)常用于基因轉(zhuǎn)移、基因敲除、抗性篩選以及轉(zhuǎn)基因動物等方面。
遠(yuǎn)慕生物G418溶液經(jīng)過濾除菌，一般工作濃度為50～1000ug/ml不等，然而不同類型的細(xì)胞需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)確定最佳濃度。在具有相對穩(wěn)定基因組的細(xì)胞(如CHO細(xì)胞)中，一旦篩選出穩(wěn)定細(xì)胞株后，無需加入G418繼續(xù)培養(yǎng)。
G418溶液(geneticin,20mg/ml)操作步驟（僅供參考）：
1.由于每種細(xì)胞對G418的敏感性不同，而且不同批次的G418的活性液不同，所以在篩選之前，需要確定G418的最佳篩選濃度，一般在50～1000μg/ml范圍內(nèi)進(jìn)行篩選。
2.將細(xì)胞制備成細(xì)胞懸液，并稀釋到1000個/ml。
3.加入不同量的G418 solution (20mg/ml)，選擇在10~14天內(nèi)使細(xì)胞全部死亡的最低G418濃度來進(jìn)行下一步的篩選試驗(yàn)。
注意事項(xiàng)：
a.盡量減少反復(fù)凍融的次數(shù)，以免失效。
b.基因轉(zhuǎn)染到細(xì)胞內(nèi)要一段時間才能表達(dá)出蛋白質(zhì), 所以篩選不能太早。
c. 篩選也不宜太遲，一般要在轉(zhuǎn)染24h之后才開始加G418篩選。因?yàn)檗D(zhuǎn)染了外源基因
的細(xì)胞代謝負(fù)荷較大，增值較慢，時間長了就會被沒有外源基因轉(zhuǎn)入的細(xì)胞所淹沒，最終導(dǎo)致篩選不出陽性克隆。
4. 隨著細(xì)胞代謝，G418的濃度和活性都會下降，應(yīng)每3~5天更換一次含有G418的篩選液，這時藥物濃度可以降至200μg/ml。
5.加藥篩選約5～7天左右，細(xì)胞會大量死亡，為了減少死亡細(xì)胞對陽性克隆的不利影響以及增加陽性克隆的得到率，可以應(yīng)用套環(huán)法或刮除法結(jié)合有限稀釋法來篩選陽性克隆。加藥后，在高倍鏡下，刮除陰性克隆，消化陽性克隆后繼續(xù)篩選培養(yǎng)?；蛘哂锰篆h(huán)套住陽性克隆，在套環(huán)內(nèi)加胰蛋白酶或EDTA消化，把消化液吸到另外一個新的孔中培養(yǎng)，最后再用有限稀釋法把陽性克隆在96孔板中篩選。
6. 一般經(jīng)過4周左右的篩選，得到的陽性克隆都比較穩(wěn)定。但是外源基因如果沒有整合到基因組中的話，目的基因還是很容易丟失的，再次篩選往往是必不可少的，經(jīng)過2次以上的篩選之后才能找到遺傳穩(wěn)定的細(xì)胞克隆。
7.盡量避免污染。
8.為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
標(biāo)簽：G418溶液(geneticin,20mg/ml)
遠(yuǎn)慕生物G418溶液經(jīng)過濾除菌，一般工作濃度為50～1000ug/ml不等，然而不同類型的細(xì)胞需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)確定最佳濃度。在具有相對穩(wěn)定基因組的細(xì)胞(如CHO細(xì)胞)中，一旦篩選出穩(wěn)定細(xì)胞株后，無需加入G418繼續(xù)培養(yǎng)。
G418溶液(geneticin,20mg/ml)操作步驟（僅供參考）：
1.由于每種細(xì)胞對G418的敏感性不同，而且不同批次的G418的活性液不同，所以在篩選之前，需要確定G418的最佳篩選濃度，一般在50～1000μg/ml范圍內(nèi)進(jìn)行篩選。
2.將細(xì)胞制備成細(xì)胞懸液，并稀釋到1000個/ml。
3.加入不同量的G418 solution (20mg/ml)，選擇在10~14天內(nèi)使細(xì)胞全部死亡的最低G418濃度來進(jìn)行下一步的篩選試驗(yàn)。
注意事項(xiàng)：
a.盡量減少反復(fù)凍融的次數(shù)，以免失效。
b.基因轉(zhuǎn)染到細(xì)胞內(nèi)要一段時間才能表達(dá)出蛋白質(zhì), 所以篩選不能太早。
c. 篩選也不宜太遲，一般要在轉(zhuǎn)染24h之后才開始加G418篩選。因?yàn)檗D(zhuǎn)染了外源基因
的細(xì)胞代謝負(fù)荷較大，增值較慢，時間長了就會被沒有外源基因轉(zhuǎn)入的細(xì)胞所淹沒，最終導(dǎo)致篩選不出陽性克隆。
4. 隨著細(xì)胞代謝，G418的濃度和活性都會下降，應(yīng)每3~5天更換一次含有G418的篩選液，這時藥物濃度可以降至200μg/ml。
5.加藥篩選約5～7天左右，細(xì)胞會大量死亡，為了減少死亡細(xì)胞對陽性克隆的不利影響以及增加陽性克隆的得到率，可以應(yīng)用套環(huán)法或刮除法結(jié)合有限稀釋法來篩選陽性克隆。加藥后，在高倍鏡下，刮除陰性克隆，消化陽性克隆后繼續(xù)篩選培養(yǎng)?；蛘哂锰篆h(huán)套住陽性克隆，在套環(huán)內(nèi)加胰蛋白酶或EDTA消化，把消化液吸到另外一個新的孔中培養(yǎng)，最后再用有限稀釋法把陽性克隆在96孔板中篩選。
6. 一般經(jīng)過4周左右的篩選，得到的陽性克隆都比較穩(wěn)定。但是外源基因如果沒有整合到基因組中的話，目的基因還是很容易丟失的，再次篩選往往是必不可少的，經(jīng)過2次以上的篩選之后才能找到遺傳穩(wěn)定的細(xì)胞克隆。
7.盡量避免污染。
8.為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
標(biāo)簽：G418溶液(geneticin,20mg/ml)
.jpg.jpg)
.jpg.jpg)
