Delafield蘇木素染色液操作步驟

產(chǎn)品名稱(chēng)：Delafield蘇木素染色液
規(guī)格：100ml 500ml
分類(lèi)：HE染色
儲(chǔ)存條件：避光，24個(gè)月
用途：常規(guī)切片
注意事項(xiàng)：屬于明礬蘇木素的一種,自然氧化3個(gè)月成熟,成熟后為深黑色,存儲(chǔ)太久后,使用時(shí)應(yīng)過(guò)濾,染色時(shí)間一般15-20分鐘。


簡(jiǎn)介：蘇木素(Hematoxylin)和伊紅(Eosin)聯(lián)合染色簡(jiǎn)稱(chēng)HE染色，是病理學(xué)和組織學(xué)最常用的一種染色方法。蘇木精為堿性天然染料，可使細(xì)胞核著色。細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)的主要成分是DNA，在DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)中，兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外，使DNA雙螺旋的外側(cè)帶負(fù)電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木精堿性染料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而被染色。蘇木素成熟的方法有自然氧化法、化學(xué)氧化法。自然氧化是指暴露于光和空氣中，這個(gè)過(guò)程比較緩慢，約需3～6個(gè)月不等，但生成物染色能力可維持很長(zhǎng)時(shí)間。Ehrlich和Delafield蘇木素就屬于這種。

Delafield蘇木素染液非常穩(wěn)定，成熟后密封可保存2年。對(duì)核染色質(zhì)染得很清晰細(xì)致，染色時(shí)間也稍長(zhǎng)。適用于教學(xué)和科研上的制片染色，用此染色液對(duì)冷凍切片染色則不理想。

染色原理：
1、細(xì)胞核染色的原理：蘇木素為堿性天然染料，可使細(xì)胞核著色。細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)的成分主要是DNA，在DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)中，兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外，使DNA雙螺旋的外側(cè)帶負(fù)電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木素堿性染料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而被染色。蘇木素在堿性溶液中呈藍(lán)色，所以細(xì)胞核被染成藍(lán)色。

2、細(xì)胞漿染色的原理：伊紅是一種化學(xué)合成的酸性染料，在一定條件下可使細(xì)胞漿著色。細(xì)胞漿的主要成分是蛋白質(zhì)，為兩性化合物，細(xì)胞漿的染色與染液的pH值密切相關(guān)。當(dāng)染色液pH值在胞漿蛋白質(zhì)等電點(diǎn)(4.7～5.0)以下時(shí)，胞漿蛋白質(zhì)以堿式電離，則細(xì)胞漿帶正電荷，就可被帶負(fù)電荷的酸性染料染色。伊紅在水中離解成帶負(fù)電荷的陰離子，與胞漿蛋白質(zhì)帶正電荷的陽(yáng)離子結(jié)合，使細(xì)胞漿著色，呈現(xiàn)紅色。

3、分化作用：染色后，用某些特定的溶液將組織過(guò)多結(jié)合的染色劑脫去，這個(gè)過(guò)程稱(chēng)為分化作用，所用的溶液稱(chēng)為分化液。在HE染色中常用1%鹽酸乙醇作為分化液，因酸能破壞蘇木素的醌型結(jié)構(gòu)，使組織與色素分離而退色。大多數(shù)組織經(jīng)蘇木素染色后，必須用1%鹽酸乙醇分化，使細(xì)胞核過(guò)多結(jié)合的蘇木素染料和細(xì)胞漿吸附的蘇木素染料脫去，再進(jìn)行伊紅染色，才能保證細(xì)胞核與細(xì)胞漿染色的分明。

4、返藍(lán)作用：分化之后，蘇木素在酸性條件下處于紅色離子狀態(tài)，呈紅色；在堿性條件下處于藍(lán)色離子狀態(tài)，呈藍(lán)色。組織切片經(jīng)酸性乙醇分化后呈紅色或粉紅色，立即用水除去組織切片上的酸而中止分化，再用弱堿性水使蘇木素染上的細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色，這個(gè)過(guò)程稱(chēng)為返藍(lán)作用或藍(lán)化作用。另外用自來(lái)水浸洗也可使細(xì)胞核返藍(lán)，但所需時(shí)間較長(zhǎng)。

自備材料：
1、鹽酸乙醇分化液
2、藍(lán)化液，如稀氨水、碳酸鋰溶液等
3、系列乙醇
4、伊紅染色液
5、4%多聚甲醛

操作步驟(僅供參考)：
(一)石蠟切片染色
1、切片脫蠟至水
①二甲苯作用。
②(可選)無(wú)水乙醇作用。
③95%的乙醇
④90%的乙醇
⑤80%的乙醇
⑥自來(lái)水或蒸餾水沖洗

2、染色
①Delafield蘇木素染色液染色
②自來(lái)水或蒸餾水沖洗
③(可選)鹽酸乙醇分化
④自來(lái)水沖洗
⑤(可選)藍(lán)化液返藍(lán)
⑥自來(lái)水沖洗
⑦伊紅染色液染色
⑧自來(lái)水沖洗

注意事項(xiàng)：
1、切片脫蠟應(yīng)盡量干凈。系列乙醇應(yīng)經(jīng)常更換新液。
2、鹽酸乙醇分化時(shí)間應(yīng)根據(jù)切片厚薄、組織類(lèi)別以及新舊而定，另外分化后自來(lái)水沖洗時(shí)間應(yīng)該足夠，以便徹底清洗酸。
3、藍(lán)化液常使用0.2～1%氨水或Scott促藍(lán)液或0.1～1%碳酸鋰溶液。
4、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。