Ehrlich蘇木素染色液操作步驟

中文名稱：Ehrlich蘇木素染色液
規(guī)格：100ml|500ml
用途：屬于常規(guī)切片HE染色的明礬蘇木素的一種,尤其適用于教學(xué)和科研上的核染色質(zhì)染色,也可用于黏蛋白染色(如軟骨的黏多糖),推薦用于骨和軟骨的染色。
注意事項：經(jīng)酸處理過的切片染色以及核的染色、骨和軟骨的染色中l(wèi)eagene推薦采用該試劑。冷凍切片染色效果不佳,成熟時間2個月,染色時間一般15-20分鐘。
儲存條件：室溫，24個月

簡介：蘇木素(Hematoxylin)和伊紅(Eosin)聯(lián)合染色簡稱HE染色，是病理學(xué)和組織學(xué)最常用的一種染色方法。蘇木精為堿性天然染料，可使細胞核著色。細胞核內(nèi)染色質(zhì)的主要成分是DNA，在DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)中，兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外，使DNA雙螺旋的外側(cè)帶負電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木精堿性染料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而被染色。蘇木素成熟的方法有自然氧化法、化學(xué)氧化法。自然氧化是指暴露于光和空氣中，這個過程比較緩慢，約需3~6個月不等，但生成物染色能力可維持很長時間。EhrlichE和Delafield蘇木素就屬于這種。Ehrlich蘇木素作為一種良好的核染色液，也可用于黏蛋白染色如軟骨的黏液多糖，骨和軟骨的染色也推薦使用Ehrlich蘇木素染液。

Jimei Ehrlich蘇木素染液非常穩(wěn)定，成熟后密封可保存2年。對核染色質(zhì)染得很清晰細致，染色時間也稍長，約15~20min。適用于教學(xué)和科研上的制片染色，用此染色液對冷凍切片染色則不理想。


染色原理：
1、細胞核染色的原理：蘇木素為堿性天然染料，可使細胞核著色。細胞核內(nèi)染色質(zhì)的成分主要是DNA，在DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)中，兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外，使DNA雙螺旋的外側(cè)帶負電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木素堿性染料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而被染色。蘇木素在堿性溶液中呈藍色，所以細胞核被染成藍色。
2、細胞漿染色的原理：伊紅是一種化學(xué)合成的酸性染料，在一定條件下可使細胞漿著色。細胞漿的主要成分是蛋白質(zhì)，為兩性化合物，細胞漿的染色與染液的pH值密切相關(guān)。當(dāng)染色液pH值在胞漿蛋白質(zhì)等電點（4.7~5.0）以下時，胞漿蛋白質(zhì)以堿式電離，則細胞漿帶正電荷，就可被帶負電荷的酸性染料染色。伊紅在水中離解成帶負電荷的陰離子，與胞漿蛋白質(zhì)帶正電荷的陽離子結(jié)合，使細胞漿著色，呈現(xiàn)紅色。
3、分化作用：染色后，用某些特定的溶液將組織過多結(jié)合的染色劑脫去，這個過程稱為分化作用，所用的溶液稱為分化液。在HE染色中常用1%鹽酸乙醇作為分化液，因酸能破壞蘇木素的醌型結(jié)構(gòu)，使組織與色素分離而退色。大多數(shù)組織經(jīng)蘇木素染色后，必須用1%鹽酸乙醇分化，使細胞核過多結(jié)合的蘇木素染料和細胞漿吸附的蘇木素染料脫去，再進行伊紅染色，才能保證細胞核與細胞漿染色的分明。
4、返藍作用：分化之后，蘇木素在酸性條件下處于紅色離子狀態(tài)，呈紅色；在堿性條件下處于藍色離子狀態(tài)，呈藍色。組織切片經(jīng)酸性乙醇分化后呈紅色或粉紅色，立即用水除去組織切片上的酸而中止分化，再用弱堿性水使蘇木素染上的細胞核呈現(xiàn)藍色，這個過程稱為返藍作用或藍化作用。另外用自來不浸洗也可使細胞核返藍，但所需時間較長。

自備材料：
1、酸性乙醇分化液
2、藍化液，如稀氨水、碳酸鋰溶液等
3、系列乙醇
4、伊紅染色液
5、4%多聚甲醛


操作步驟（僅供參考）
（一）石蠟切片染色
1、切片脫蠟至水①二甲苯作用2次，每次5~10min。
②（可選）無水乙醇作用2次，每次3~5min。
③95%的乙醇3~5min。
④90%的乙醇3~5min。
⑤80%的乙醇3~5min。
⑥自來水或蒸餾水沖洗1~3min。

2、染色
①Ehrlich蘇木素染色液染色15~20min。
②自來水或蒸餾水沖洗5~10s。
③（可選）鹽酸乙醇分化2~5s。
④自來水沖洗20~30s。
⑤（可選）藍化液返藍20~40s。
⑥自來水沖洗30~60s。
⑦伊紅染色液染色3~5min。
⑧自來水沖洗1~5s。

3、脫水、透明、封固
①80%乙醇10~20s。
②90%乙醇10~20s。
③95%乙醇作用2次，每次1~2min。
④無水乙醇作用2次，每次2~3min。
⑤二甲苯透明3次，每次2~3min。
⑥中性樹脂封片。
染色結(jié)果：細胞核呈藍色；細胞質(zhì)、肌纖維、膠原纖維等呈深淺不一的紅色；角蛋白、紅細胞等呈明亮的橙紅色。

（二）細胞染色
1、４%多聚甲醛固定10~20min。
2、自來水沖洗２次，每次２min。
3、蒸餾水沖洗２次，每次２min。
4、染色、脫蠟、透明、封固步驟同石蠟切片的染色步驟，作用時間應(yīng)相應(yīng)縮短。
染色結(jié)果：細胞核呈藍色；細胞質(zhì)、纖維呈紅色。


注意事項：
1、切片脫蠟應(yīng)盡量干凈。系列乙醇應(yīng)經(jīng)常更換新液。
2、鹽酸乙醇分化時間應(yīng)根據(jù)切片厚薄、組織類別以及新舊而定，另外分化后自來水沖洗時間應(yīng)該足夠，以便徹底清洗酸。
3、藍化液常使用0.2~1%氨水或Scott促藍液或0.1~1%碳酸埋溶液。
4、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。