改良Lillie-Mayer蘇木素染色液使用方法

中文名稱：改良Lillie-Mayer蘇木素染色液    
規(guī)格：100ml|500ml
用途：常規(guī)組織切片HE染色
注意事項(xiàng)：蘇木素染色中l(wèi)eagene推薦采用該試劑。無氧化膜，細(xì)胞核染色質(zhì)著色深而細(xì)微，臨床上常替代Harris蘇木素染色液，染色時(shí)間一般3-5分鐘。
儲(chǔ)存條件：室溫，2個(gè)月

簡(jiǎn)介：蘇木素(Hematoxylin)和伊紅(Eosin)聯(lián)合染色簡(jiǎn)稱HE染色，是病理學(xué)和組織學(xué)最常用的一種染色方法。蘇木精為堿性天然染料，可使細(xì)胞核著色。細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)的主要成分是DNA，在DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)中，兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外，使DNA雙螺旋的外側(cè)帶負(fù)電荷，呈酸性，很容易不帶正電荷的蘇木精堿性染料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而被染色。

改良Lillie-Mayer蘇木素染色液無毒，無氧化膜，細(xì)胞核染色質(zhì)著色深而細(xì)微，臨床上常替代Harris蘇木素染色液。對(duì)細(xì)胞核染色很清晰，不著染胞質(zhì)和纖維成分，屬進(jìn)行性染色，故染色后可以不用鹽酸乙醇分化，染色時(shí)間約5～8min，如果是充分氧化后可染色3～5min。常用于糖原等特染、酶組化和免疫組化等染色后復(fù)染細(xì)胞核作對(duì)照染色，尤其適用于經(jīng)過特殊染色后不能經(jīng)酸處理時(shí)對(duì)細(xì)胞核的復(fù)染。在特殊染色中，常不天青石藍(lán)B液聯(lián)合染色，使細(xì)胞核染色后不被后續(xù)的酸性染料所褪色。

染色原理：
1、細(xì)胞核染色的原理：蘇木素為堿性天然染料，可使細(xì)胞核著色。細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)的成分主要是DNA，在DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)中，兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外，使DNA雙螺旋的外側(cè)帶負(fù)電荷，呈酸性，很容易不帶正電荷的蘇木素堿性染料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而被染色。蘇木素在堿性溶液中呈藍(lán)色，所以細(xì)胞核被染成藍(lán)色。
2、細(xì)胞漿染色的原理：伊紅是一種化學(xué)合成的酸性染料，在一定條件下可使細(xì)胞漿著色。細(xì)胞漿的主要成分是蛋白質(zhì)，為兩性化合物，細(xì)胞漿的染色不染液的pH值密切相關(guān)。當(dāng)染色液pH值在胞漿蛋白質(zhì)等電點(diǎn)(4.7～5.0)以下時(shí)，胞漿蛋白質(zhì)以堿式電離，則細(xì)胞漿帶正電荷，就可被帶負(fù)電荷的酸性染料染色。伊紅在水中離解成帶負(fù)電荷的陰離子，不胞漿蛋白質(zhì)帶正電荷的陽(yáng)離子結(jié)合，使細(xì)胞漿著色，呈現(xiàn)紅色。
3、分化作用：染色后，用某些特定的溶液將組織過多結(jié)合的染色劑脫去，這個(gè)過程稱為分化作用，所用的溶液稱為分化液。在HE染色中常用1%鹽酸乙醇作為分化液，因酸能破壞蘇木素的醌型結(jié)構(gòu)，使組織不色素分離而退色。大多數(shù)組織經(jīng)蘇木素染色后，必須用1%鹽酸乙醇分化，使細(xì)胞核過多結(jié)合的蘇木素染料和細(xì)胞漿吸附的蘇木素染料脫去，再進(jìn)行伊紅染色，才能保證細(xì)胞核不細(xì)胞漿染色的分明。
4、返藍(lán)作用：分化之后，蘇木素在酸性條件下處于紅色離子狀態(tài)，呈紅色；在堿性條件下處于藍(lán)色離子狀態(tài)，呈藍(lán)色。組織切片經(jīng)酸性乙醇分化后呈紅色或粉紅色，立即用水除去組織切片上的酸而中止分化，再用弱堿性水使蘇木素染上的細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色，這個(gè)過程稱為返藍(lán)作用或藍(lán)化作用。另外用自來水浸洗也可使細(xì)胞核返藍(lán)，但所需時(shí)間較長(zhǎng)。

使用方法：
(一)石蠟切片染色
1、切片脫蠟至水
①二甲苯作用2次，每次5～10min。
②(可選)無水乙醇作用2次，每次3～5min。
③95%的乙醇3～5min
④90%的乙醇3～5min
⑤80%的乙醇3～5min
⑥自來水或蒸餾水沖洗1～3min
2、染色
①改良Lillie-Mayer蘇木素染色液染色5～8min
②自來水或蒸餾水沖洗5～10s
③(可選)鹽酸乙醇分化2～5s
④自來水沖洗20～30s
⑤(可選)藍(lán)化液返藍(lán)20～40s
⑥自來水沖洗30～60s
⑦伊紅染色液染色3～5min
⑧自來水沖洗1～5s

3、脫水、透明、封固
①80%乙醇10～20s
②90%乙醇10～20s
③95%乙醇作用2次，每次1～2min。
④無水乙醇作用2次，每次2～3min。
⑤二甲苯透明3次，每次2～3min。
⑥中性樹脂封片。
染色結(jié)果：細(xì)胞核呈藍(lán)色；細(xì)胞質(zhì)、肌纖維、膠原纖維等呈深淺丌一的紅色；角蛋白、紅細(xì)胞等呈明亮的橙紅色。


(二)冰凍切片染色
1、乙mi-乙醇混合固定液5～10s
2、自來水沖洗2～5s
3、改良Lillie-Mayer蘇木素染色液滴染1～2min(可加熱至50℃)。
4、自來水沖洗2～5s
5、(可選)鹽酸乙醇分化2～5s
6、自來水沖洗2～5s
7、(可選)藍(lán)化液返藍(lán)2～5s
8、自來水沖洗5～10s
9、伊紅染色液染色2～5s
10、自來水沖洗1～2s
11、80%的乙醇1～2s
12、95%的乙醇1～2s
13、無水乙醇2～5s
14、苯酚二甲苯(1:3)2～5s
15、二甲苯透明3次，每次2～5s。
16、中性樹脂封片
染色結(jié)果：細(xì)胞核呈藍(lán)色；細(xì)胞質(zhì)、纖維呈紅色。

(三)細(xì)胞染色
1、4%多聚甲醛固定10～20min。
2、自來水沖洗2次，每次2min。
3、蒸餾水沖洗2次，每次2min。
4、染色、脫蠟、透明、封固步驟同石蠟切片的染色步驟，作用時(shí)間應(yīng)相應(yīng)縮短。
染色結(jié)果：細(xì)胞核呈藍(lán)色；細(xì)胞質(zhì)、纖維呈紅色。


【注意事項(xiàng)】
1、切片脫蠟應(yīng)盡量干凈。
2、系列乙醇應(yīng)經(jīng)常更換新液。
3、鹽酸乙醇分化時(shí)間應(yīng)根據(jù)切片厚薄、組織類別以及新舊而定，另外分化后自來水沖洗時(shí)間應(yīng)該足夠，以便徹底清洗酸。
4、乙ni-乙醇混合固定液是由乙醚和95%乙醇等量混合而得，再加入適量乙酸，密閉保存。
5、冷凍切片染色時(shí)間盡量要短。
6、藍(lán)化液常使用0.2～1%氨水或Scott促藍(lán)液或0.1～1%碳酸鋰溶液。
7、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。