MS培養(yǎng)基配方及其特點(diǎn)

植物組織培養(yǎng)概念（廣義）又叫離體培養(yǎng)，指從植物體分離出符合需要的組織、器官或細(xì)胞，原生質(zhì)體等，通過無菌操作在人工控制條件下進(jìn)行培養(yǎng)以獲得再生的完整植株或生產(chǎn)具有經(jīng)濟(jì)價(jià)值的其他產(chǎn)品的技術(shù)。

植物組織培養(yǎng)概念（狹義）指用植物各部分組織，如形成層、薄壁組織、葉肉組織、胚乳等進(jìn)行培養(yǎng)獲得再生植株，也指在培養(yǎng)過程中從各器官上產(chǎn)生愈傷組織的培養(yǎng)，愈傷組織再經(jīng)過再分化形成再生植物。

MS培養(yǎng)基（Murashige and Skoog medium）是植物組織培養(yǎng)中最常見的培養(yǎng)基。很多植物的細(xì)胞、組織和器官在MS培養(yǎng)基上表現(xiàn)良好的生長和發(fā)育。1/2MS培養(yǎng)基，即MS培養(yǎng)基無機(jī)鹽濃度減半，也被廣泛采用。
1962年7月，Toshio Murashige 和Folke Skoog在 Physiologia Plantarum雜志發(fā)表了標(biāo)題為A Revised Medium for Rapid Growth and Bio Assays with Tobacco Tissue Cultures的研究論文，其中提出了MS培養(yǎng)基的配方。

MS培養(yǎng)基淵源

Toshio Murashige作為Folke Skoog教授的博士生以煙草髓質(zhì)（pith）和愈傷組織培養(yǎng)體系來尋找新的植物激素（organic growth factors）。Toshio Murashige在White培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，研究了氮磷鉀等十幾種元素在不同濃度下對(duì)煙草愈傷組織生長量的影響，通過繪制元素濃度——生物量曲線找到了上述元素的最大適宜濃度。

這些實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，提升氮和鉀的濃度對(duì)煙草愈傷組織生物量的增加最為有效。

MS培養(yǎng)基最大的特點(diǎn)是無機(jī)鹽的濃度特別高，在常見的植物培養(yǎng)基中是最高的。

MS培養(yǎng)基中的氮元素含量特別高，達(dá)到了B5培養(yǎng)基的2.3倍，WPM培養(yǎng)基的4.8倍和White培養(yǎng)基的30倍。這也是有些植物的組織在MS培養(yǎng)基上生長發(fā)育受阻的原因，通?？梢酝ㄟ^降低濃度來得到改善。

與生長良好的植物的平均元素組成相比，MS培養(yǎng)基中氮和鉀元素是足夠的，而磷、鈣和鎂的含量明顯較低。

每種植物的元素組成都有其特點(diǎn)，根據(jù)這些特點(diǎn)調(diào)整培養(yǎng)基的配方可以提升離體培養(yǎng)的效果。

培養(yǎng)基的配制

配制培養(yǎng)基有兩種方法可以選擇，一是購買培養(yǎng)基中所有化學(xué)藥品，按照需要自己配制；二是購買商品的混合好的培養(yǎng)基基本成分粉劑，如MS、B5等。自己配制可以節(jié)約費(fèi)用，但浪費(fèi)時(shí)間、人力、且有時(shí)由于藥品的質(zhì)量問題，給實(shí)驗(yàn)帶來麻煩。就目前國內(nèi)的情況看，大部分還是自己配制。

1、配制幾種母液

一般配制成100倍MS有機(jī)母液。配成1L母液，倒入1L試劑瓶中，存放于冰箱中。

1.1配制MS大量元素母液

1.2配制MS微量元素母液

1.3配制MS有機(jī)母液

1.4配制MS鐵鹽母液

MS母液有5種大量元素母液，加上MS微量元素母液、MS有機(jī)母液和MS鐵鹽母液，共8種母液。

2、激素母液的配制

各種生長素和細(xì)胞分裂素要單獨(dú)配制，不能混合在一起，生長素類一般要先用少量95%的酒精或1當(dāng)量的NaOH溶解，細(xì)胞分裂素一般要先用1當(dāng)量的鹽酸溶解，然后再加蒸餾水定容。一般取100mg配成100ml母液。

3、配制培養(yǎng)基

以配置1L MS培養(yǎng)基為例，按順序進(jìn)行如下操作：

3.1先在燒杯中放入一些蒸餾水。

3.2分別取上面八種母液10ml倒入。

3.3一般稱取30g蔗糖倒入，攪拌溶解。

3.4加蒸餾水用量筒定溶至1L。

3.5按設(shè)計(jì)好的方案添加各種激素，由于激素的用量很小，而且激素對(duì)組培植物的生長至關(guān)重要。所以有條件的話最好用微量可調(diào)移液器吸取，減少誤差。

3.6用精密試紙或酸度計(jì)調(diào)整PH至5.7～5.8。（有條件的話使用酸度計(jì)，比較精確） 可配1當(dāng)量的HCL和1當(dāng)量的NaOH用來調(diào)溶液PH值。

1當(dāng)量HCL配制：用量筒量取8.3ml配成100ml溶液。

1當(dāng)量NaOH配制：稱取NaOH 4g 配成100ml溶液。

3.7稱取5g左右瓊脂粉（質(zhì)量好的瓊脂粉),倒入上面配好的溶液中，放在電爐上加熱至沸騰，直到瓊脂粉熔化。

3.8稍微冷卻后，分裝入培養(yǎng)容器中。無蓋的培養(yǎng)容器要用封口膜或牛皮紙封口，用橡皮筋或繩子扎緊。

3.9放入消毒滅菌鍋滅菌，滅菌20分鐘左右。

3.10滅菌后從滅菌鍋中取出培養(yǎng)基，平放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上令其冷卻凝固。