全血細胞培養(yǎng)染色體技術(shù)常用試劑配制

一、國內(nèi)實驗室應(yīng)用試劑配制
（一）培養(yǎng)液
（1）RPMI1640培養(yǎng)液：稱取RPMI培養(yǎng)基9.8g，碳酸氫鈉1.9g、青霉素100u/ml，加雙蒸水至1000ml，調(diào)節(jié) pH7.2～7.4無菌過濾凍存?zhèn)溆谩?br> （2）小牛血清商品：成都生物制品廠。
（3）植物凝集素（PHA）：自制或成品（重慶藥檢所）。
（4）pH調(diào)整液：5% NaHCO3溶液高壓滅菌（8磅15min），0.1N稀鹽酸液100ml。
（5）秋水仙素：10mg/ml無菌過濾高壓滅菌（8磅10min）。
（6）磷酸緩沖液：pH7.4。
磷酸氫二鈉28.8g(H2O)、磷酸二氫鉀2.67g(無水)，溶于1000ml雙蒸水中，加肝素，終濃度為100u/ml。

（7）Giemsa染色液：
Giemsa粉劑 1g
甘油 66ml
在研缽中，加入少量甘油油仔細研磨然后放甘油全部加磨，60℃溫箱中保溫2h，冷卻后加入甲醇66ml。裝入有色瓶中混合待用。染色時用pH7.4磷酸緩沖液稀釋10倍，隨配隨用。
 
（二）固定液
（1）甲酸：冰乙酸3：1混合即用。
（2）PBS緩沖液配制：
NaCl 16g Na2HPO4(12H2O) 5.65g
KCl 0.4g KH2PO4 0.4g
加雙蒸水至1000ml pH7.0。
取5%胰酶（生理鹽水配制）1ml加入50ml PBS液中（最終濃度為0.025%），4℃冰箱待用。

二、細胞培養(yǎng)（Bhatl B和McGee JOD,1990）
1．完全培養(yǎng)基
RPMI 76.0ml
胎牛血清 20.0ml
植物凝集素 2.0ml
抗生素/抗菌素溶液（100）