遠(yuǎn)慕實驗: 最亮的細(xì)胞轉(zhuǎn)染怎么做？

    做轉(zhuǎn)染實驗時小編就抱著一個信念，就是要給細(xì)胞點“顏色”看（熒光），但你知道嗎？就這個簡單的實驗過程，小小的細(xì)胞卻有著大大的能量，實驗過程中帶陽離子的脂質(zhì)體充當(dāng)著“搬運工”的角色將質(zhì)粒從胞外“抓”到胞內(nèi)，而細(xì)胞為質(zhì)粒的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、翻譯提供“場所和原材料”，自己也跟著“增光填色”,但“上色”過程中會遇到一些問題，總結(jié)下來主要有以下二個方面：

    細(xì)胞狀態(tài)差

    轉(zhuǎn)染效率低

1. 

    Q1：轉(zhuǎn)染后細(xì)胞狀態(tài)較差

    A：分析：主要是鋪板和反應(yīng)液配制的原因

     細(xì)胞狀態(tài)是整個實驗的關(guān)鍵，如果細(xì)胞狀態(tài)不好，則轉(zhuǎn)染后細(xì)胞狀態(tài)當(dāng)然就好不了

     鋪板：過多或不均勻，細(xì)胞長的太滿就會狀態(tài)較差

     脂質(zhì)體本身有毒性，如果脂質(zhì)體加入量太多，會導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)較差，或者細(xì)胞死亡，建議在做正式實驗前，先做一下預(yù)實驗，摸索一下質(zhì)粒和脂質(zhì)體的配比。

    Q2：轉(zhuǎn)染后熒光效率低

    A：分析：主要是細(xì)胞原因和“搬運”過程中的問題

     1、細(xì)胞狀態(tài)仍然是重中之重，如果有一段時間轉(zhuǎn)染效果很不理想，必須要換一批次細(xì)胞；

     2、加入目的質(zhì)粒后輕輕混勻，太用力會破壞混合液的結(jié)構(gòu)，

     3、質(zhì)粒與轉(zhuǎn)染試劑的比值： 過高一部分質(zhì)粒不能進(jìn)入細(xì)胞，過低“搬運工”太多，有毒性且浪費；

     4、吸、打液體時注意槍頭內(nèi)液面高度，是否完全打出；

     5、反應(yīng)液配好后等待20min，質(zhì)粒才會被完全包裹；

     6、反應(yīng)液滴加加入細(xì)胞，使“脂質(zhì)體+質(zhì)?！本鶆蚍植?；

     7、質(zhì)粒反復(fù)凍融影響濃度，盡量減少凍融次數(shù)；脂質(zhì)體 -20℃保存，用完應(yīng)馬上放回；

     8、必要時需要檢測一下質(zhì)粒的濃度是否準(zhǔn)確；