傷口愈合/細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)方法分享

細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)（Wound Healing)是一種操作簡單，經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的研究細(xì)胞遷移/腫瘤侵襲的體外試驗(yàn)方法。這種方法的原理是，當(dāng)細(xì)胞長到融合成單層狀態(tài)時(shí)，在融合的單層細(xì)胞上人為制造一個(gè)空白區(qū)域，稱為“劃痕”。劃痕邊緣的細(xì)胞會(huì)逐漸進(jìn)入空白區(qū)域使“劃痕”愈合?；镜牟襟E包括“劃痕”的制造，細(xì)胞遷移期間圖像的獲得以及后期數(shù)據(jù)的處理。

特點(diǎn)：

1. 在一定程度上模擬了體內(nèi)細(xì)胞遷移的過程。

2. 非常適合研究細(xì)胞與胞外基質(zhì)（ECM），細(xì)胞與細(xì)胞之間相互作用引起的細(xì)胞 遷移。

3. 與包括活細(xì)胞成像在內(nèi)的顯微鏡系統(tǒng)兼容，可用于分析細(xì)胞間的相互作用

4. 研究細(xì)胞遷移的體外實(shí)驗(yàn)中最簡單的方法。



傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)步驟：

1. 培養(yǎng)板接種細(xì)胞之前先用marker筆在12孔板背面畫橫線標(biāo)記（方便拍照時(shí)定位同一 個(gè)視野）。

2. 細(xì)胞消化后接入12孔板，數(shù)量以貼壁后鋪滿板底為宜（數(shù)量少時(shí)可培養(yǎng)一段時(shí)間至鋪滿板底）。

3. 細(xì)胞鋪滿板底后，用1 ml槍頭垂直于孔板制造細(xì)胞劃痕，盡量保證各個(gè)劃痕寬度一致。（人工槍頭制造劃痕難以保證劃痕寬度的一致性，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，這也是該方法最大的缺陷。）

4. 吸去細(xì)胞培養(yǎng)液，用PBS沖洗孔板三次，洗去劃痕產(chǎn)生的細(xì)胞碎片。

5. 加入無血清培養(yǎng)基，拍照記錄。

6. 將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)，每隔4-6小時(shí)取出拍照。

7. 根據(jù)收集圖片數(shù)據(jù)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

Culture Insert方法

1. 準(zhǔn)備細(xì)胞，培養(yǎng)液，culture Insert。

2. 如圖，將細(xì)胞接種于Dish中間的Insert，細(xì)胞長滿Insert 區(qū)域后用鑷子移除Insert即可產(chǎn)生500 μm寬度的劃痕。

3. 每隔4-6小時(shí)拍照記錄。

4. 根據(jù)收集圖片數(shù)據(jù)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

總結(jié)：相比較于傳統(tǒng)的劃痕實(shí)驗(yàn)，Ibidi的設(shè)計(jì)更科學(xué)、重現(xiàn)性更好