遠(yuǎn)慕生物:細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染的解決方案

支原體最早發(fā)現(xiàn)于 1898 年，1956 年 Robinson LB 首次從細(xì)胞培養(yǎng)物中分離出支原體。它廣泛存在于自然界中。污染細(xì)胞最常見的支原體包括發(fā)酵支原體（M.Fementans）、豬鼻支原體（M.hyorhinis）、口腔支原體（M.orale）、精氨酸支原體（M.arginina）、梨支原體（M.pirum）、唾液支原體（M.salivarium）和人型支原體（M.hominis）。

支原體的特點(diǎn)：

1、支原體是最小、最簡(jiǎn)單、能夠自我復(fù)制的原核生物，其大小介于細(xì)菌和病毒之間。

2、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，無(wú)細(xì)胞壁，形態(tài)多樣，可通過細(xì)菌濾器。

3、對(duì)一般抗生素不敏感，是細(xì)胞培養(yǎng)污染的一種常見微生物。

4、多數(shù)支原體污染比較隱蔽，顯微鏡下觀察，可見單個(gè)荷包樣菌落。

5、被支原體污染后的細(xì)胞培養(yǎng)物，引起細(xì)胞形態(tài)學(xué)和功能的改變，且很難清除。

支原體污染的特征：

    細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變

    細(xì)胞生長(zhǎng)模式的改變

    細(xì)胞活力減弱

    轉(zhuǎn)染效力顯著降低

    培養(yǎng)基上可見黑色顆粒

    細(xì)胞表面可見黑色孔洞

支原體污染的檢測(cè)：

1、電子顯微鏡技術(shù)

電鏡中可看到支原體的多種增殖方式。

該技術(shù)快速、簡(jiǎn)便、省事省力，但敏感性不夠高，能作為篩查方法，而對(duì)于可疑或陽(yáng)性的細(xì)胞株，需要其他方法檢測(cè)鑒定。

2、培養(yǎng)法

支原體在固體培養(yǎng)基上形成特征的「油煎蛋」菌落。

理想的培養(yǎng)法應(yīng)采用多功能的培養(yǎng)基，以降低假陰性率，為增加對(duì)低滴度和低活力支原體檢出率，應(yīng)采用有氧和無(wú)氧兩種培養(yǎng)條件及幾種傳代方式，或者與生物化學(xué)試驗(yàn)相結(jié)合檢測(cè)支原體。

3、染色法

（1）姬姆薩或地衣紅染色

姬姆薩染色后為淡紫色或藍(lán)色，地衣紅染色鏡下觀察可見支原體呈暗紫色小點(diǎn)，位于細(xì)胞外或細(xì)胞之間。

（2）DNA 熒光染色法

支原體污染的細(xì)胞不僅在細(xì)胞核而且在細(xì)胞核外及細(xì)胞膜上均可見散在熒光。

該方法操作較為簡(jiǎn)便，但輕度污染不易檢出，且 DNA 熒光染色靈敏度不高、檢測(cè)時(shí)需要熒光素及熒光顯微鏡，不能檢測(cè)到種，一般要求培養(yǎng)無(wú)污染的指示細(xì)胞作為對(duì)照。

4、PCR 檢測(cè)法

PCR 檢測(cè)方法已經(jīng)成為一種常用的有效檢測(cè)微生物的方法，尤其適用于培養(yǎng)困難和抗原性復(fù)雜的細(xì)菌檢測(cè)鑒定，可快速檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)物、生物制品、血清等生物材料中的支原體污染，比常規(guī)培養(yǎng)法和 DNA 間接熒光染色法快 5-10 天。

目前，北京寶威特生物提供性價(jià)比極高的專門針對(duì)支原體污染的全面解決方案，根據(jù)不同的用戶需求，提供國(guó)產(chǎn)和進(jìn)口兩套支原體檢測(cè)產(chǎn)品。

支原體解決方案包括：

1、針對(duì)高度保守的支原體 16SrRNA 序列設(shè)計(jì)，可檢測(cè)的支原體種類非常廣泛，不會(huì)受真核細(xì)胞或細(xì)菌 DNA 干擾。

2、基于普通 PCR 方法的產(chǎn)品：普通版可檢測(cè) 49 種支原體，升級(jí)版更可廣泛檢測(cè)超過 209 種支原體，并配備了三重核查系統(tǒng)，確保結(jié)果準(zhǔn)確。

3、新開發(fā)的基于實(shí)時(shí)熒光 PCR 方法的產(chǎn)品：可檢測(cè) 70 種支原體，顯著提高了檢測(cè)的敏感性使其檢測(cè)限達(dá)到 10 CFU/ml，并配備了內(nèi)部質(zhì)控和陽(yáng)性質(zhì)控以確保實(shí)時(shí)熒光 PCR 檢測(cè)結(jié)果的有效性。

4、經(jīng)本試劑盒測(cè)試的支原體菌株包括：肺炎支原體（M.pneumoniae）、精氨酸支原體（M.argnini）、豬鼻支原體（M.hyorhinis）、發(fā)酵支原體（M.fermentans）、口腔支原體（M.orale）和無(wú)膽甾支原體（A.laidlawii），涵蓋了所有常見的支原體污染種類。

5、檢測(cè)所需的試劑都預(yù)先混合、并分裝至反應(yīng)管，只需加入模板 DNA 即可。

6、通過 8 聯(lián)管檢測(cè)體系有效避免交叉污染。

7、配套用于預(yù)防支原體污染的噴霧，以及用于消除支原體污染的抗生素溶液，全面清除支原體的污染。