遠(yuǎn)慕生物詳談:石蠟切片及染色過程

一、 石蠟切片

1.  取材: 刀片要求鋒利而薄,組織厚度約2—3mm, 大小1.5×1.5×0.2～0.3cm為宜. 取材時(shí)間越快越好.

2.  固定: 組織取下后應(yīng)立即放入10%福爾馬林(相當(dāng)于4%甲醛)固定.

注意:

(1). 固定液量應(yīng)為組織塊體積的40倍.

(2) 固定時(shí)間固定時(shí)間與使用的固定液種類和組織塊大小, 溫度等有關(guān). 一般為3—24h.

(3)固定溫度大多可在室溫固定, 在低溫(4℃)時(shí)間應(yīng)延長(zhǎng).

(4)固定容器應(yīng)大些.

3.  漂洗: 流水沖洗2—10h.

4.  脫水: 從低濃度酒精到高濃度酒精.

70%(數(shù)分鐘)→80%(60-120’)→90%(60-120’)→95%(60-120’)→95%(60-120’)→100%(60-120’)→100%(60-120’).

5.  透明: 組織塊脫水后必須經(jīng)過一種既能與酒精混合又能溶解石蠟的溶劑, 而使石蠟進(jìn)入組織塊. 常用二甲苯, 一般浸泡30m即可.

6.  浸蠟: 組織經(jīng)透明后在熔化的石蠟內(nèi)浸漬的過程稱浸蠟. 一般需經(jīng)2—3次浸漬才能完成, 總時(shí)間為3—4h. 用于浸蠟的石蠟熔點(diǎn)為52—56℃.

7.  包埋: 先將熔化的石蠟倒入包埋框再用加熱的鑷子將組織塊放入. 包埋面必須平整. 包埋后石蠟稍凝后可移入冷水或冰箱中加速凝固.

8.  切片: 修塊→切片→展片→撈片→烤片.

二、 HE染色

1.  染色前切片處理

(1)  脫福爾馬林色素.

(2)  脫汞鹽結(jié)晶.

(3)  脫黑色素.

2. 染色步驟

二 甲苯脫蠟(10’)→ 無水乙醇洗去二甲苯(1’×2次)→95%酒精(1’)→90%酒精(1’)→85%酒精(1’)→自來水洗(2’)→蘇木精染色(1—5’)→自來水洗 (1’)→1%鹽酸酒精分化20s→自來水洗(1’)→稀氨水(1%)反藍(lán)30s→自來水或蒸餾水洗(1’)→伊紅染色(20s—5min)→自來水洗 (30s)→85%酒精脫水(20s)→90%酒精脫水(30s)→95%酒精(1’)→95%酒精(1’)→100%酒精(2’)→100%酒精 (2’)→二甲苯(2’)→中性樹膠封片.

3.   染色結(jié)果: 細(xì)胞核呈蘭色, 胞漿呈紅色.

三、 鹽酸酒精的配制

濃鹽酸0.5—1ml + 75%酒精99ml.

此液用一段時(shí)間后需延長(zhǎng)或更換液體, 新液體分化時(shí)間要短.