偶氮熒光桃紅染色液實驗步驟

中文名稱: 偶氮熒光桃紅染色液
規(guī)格：50ml
分類：結(jié)締染色
儲存方式：4℃,避光,12個月
用途：肌纖維染色,可區(qū)分肌纖維和膠原纖維
注意事項：肌纖維和肌上皮細(xì)胞呈玫瑰紅色,膠原纖維呈黃色。

簡介：肌纖維(Musclefiber)屬于肌組織成分，由肌細(xì)胞組成。根據(jù)形態(tài)和功能特點，肌纖維可以分為平滑肌(又稱橫紋肌)、骨骼肌、心肌。肌纖維染色的方法有很多種，如麗春紅法、苯胺藍(lán)法、鎢磷鎢酸蘇木素法等。鞣酸-偶氮熒光桃紅法是利用兩種酸性染料先后作用而完成鑒別染色。肌纖維染色液(Puchtler鞣酸偶氮熒光桃紅法)其染色原理在于鞣酸容易進(jìn)入滲透性強(qiáng)的膠原纖維，膠原纖維呈黃色；偶氮熒光桃紅容易進(jìn)入滲透性較低的肌纖維，肌纖維呈紅色。偶氮熒光桃紅染色液用于區(qū)分肌纖維和膠原纖維，對比清晰，不宜褪色，同時可以顯示肌上皮細(xì)胞，可用于乳腺和皮膚等肌上皮細(xì)胞瘤的診斷。

操作步驟(僅供參考)：
1、常規(guī)組織固定于Bouin固定液(Carnoy固定液或中性福爾馬林亦可)。
2、直接轉(zhuǎn)入95%的乙醇中，常規(guī)脫水包埋。
3、石蠟切片厚4μm，常規(guī)脫蠟至水。
4、流水沖洗1min。
5、磷鉬酸分化液處理。
6、入偶氮熒光桃紅染色液浸染。
7、酸性醇分化液分化。
8、無水乙醇反復(fù)脫水多次。
9、常規(guī)脫水透明，中性樹膠封固。

注意事項：
1）在實驗后，請注意回收稀釋的抗體，回收的抗體在進(jìn)行Western實驗時至少可以重復(fù)使用10次。
2）稀釋后的抗體，包括已經(jīng)使用過的稀釋抗體，4℃保存，回收后重復(fù)使用的抗體，使用方法同新鮮稀釋的抗體。
3）如果在重復(fù)使用過程中發(fā)現(xiàn)抗體出現(xiàn)輕微混濁現(xiàn)象，可以10000g離心1-3分鐘，取上清用于后續(xù)檢測。
4）如果回收的抗體出現(xiàn)明顯的絮狀物或長霉長菌等情況，則可以考慮廢棄該抗體。