尼氏染色液(甲基紫法)使用說明書

介紹：神經(jīng)元細胞體包括一個具有皺褶核膜的大細胞核、稀疏的染色質(zhì)和一個明顯的核仁。在細胞體中細胞質(zhì)是尼氏顆粒，即能夠代表粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)并在很多神經(jīng)元中產(chǎn)生特異的斑點狀嗜堿性表現(xiàn)的嗜堿性顆粒。尼氏顆?？梢杂煤芏嗳旧珌盹@示如中性紅、亞甲基藍、甲苯胺藍和甲基紫等。染色的變異、pH和分化的時間使一些染色既可以僅突出尼氏物質(zhì)，也可以顯示神經(jīng)元的細胞核和神經(jīng)膠質(zhì)。尼氏體(Nissl body)或稱尼氏小體是分布于神經(jīng)細胞胞質(zhì)內(nèi)的三角形或橢圓形小塊狀物質(zhì)，能被堿性染料如硫堇、亞甲藍、甲苯胺藍和焦油紫等染料染成紫藍色。各種神經(jīng)細胞內(nèi)都含有尼氏體，但其形狀、數(shù)量、分布位置常常不同。尼氏體也存在于樹突中，但不在于軸突和包體的軸丘。尼氏體會因為生理狀態(tài)的變化而變化，尼氏體是神經(jīng)元內(nèi)合成蛋白質(zhì)合成的重要部位，當(dāng)神經(jīng)元受到刺激后，包體內(nèi)的尼氏體會明顯減少。

尼氏染色試劑盒(Nissl Stain，甲基紫法)主要特點是操作簡便、染色穩(wěn)定、分化時間短，適用范圍廣，可以用于石蠟組織切片的尼氏物質(zhì)、神經(jīng)元等的染色，尼氏體的存在和消失是神經(jīng)細胞是否受損的重要指標(biāo)，當(dāng)發(fā)生腦炎、腦缺血、軸突反應(yīng)等情況時，尼氏體會發(fā)生溶解甚至消失。

自備材料：
1、中性福爾馬林溶液
2、顯微鏡
3、蒸餾水

參考操作(僅供參考)：
1、固定:可采用乙醇、Carnoy固定液或中性福爾馬林溶液。
2、組織切片: 石蠟切片(見注意事項4)。
3、切片脫蠟入水。
4、用甲基紫染色液涂片，染色。
5、蒸餾水沖洗。
6、用Nissl Differentiation分化，直到大部分染色被消除。
7、直接經(jīng)無水乙醇至二甲苯，顯微鏡下觀察。
8、如果有必要，重復(fù)步驟6和7。重復(fù)時，給予少量Nissol Differentiation分化。
9、在二甲苯中充分沖洗。加拿大香脂或DPX封片。

染色結(jié)果：
尼氏物質(zhì)或尼氏小體   紫黑藍色
神經(jīng)元   淡紫藍色
細胞核   紫藍色

注意事項：
1、 尼氏體離體后容易溶解，所以組織取出后應(yīng)立即固定，否則難以著色。
2、 組織固定起著非常重要的作用，固定可采用乙醇、Carnoy固定液或中性福爾馬林溶液。
3、 本染色液對石蠟組織切片的尼氏染色效果較好。
4、 如果要證實尼氏物質(zhì)的存在，那么染色后必須要用Nissol Differentiation分化。
5、 石蠟切片厚度7～10?m或25?m(皮質(zhì)神經(jīng)元密度的評估要用25?m厚的切片)。
6、 染色后的標(biāo)本務(wù)必避光保存，否則容易褪色。
7、 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。