臺(tái)盼藍(lán)染色液(0.4%)配制方法

中文名稱(chēng)：臺(tái)盼藍(lán)染色液(0.4%)
英文名稱(chēng)：Trypan Blue Stain solution,0.4%
CAS：72-57-1
分子式：C34H24N6O14S4Na4
分子量：960.81
產(chǎn)品規(guī)格：50mL|100mL
用途：又稱(chēng)錐蟲(chóng)藍(lán)染色液，用于細(xì)胞染色，細(xì)胞計(jì)數(shù)
儲(chǔ)存條件：4℃，12個(gè)月

簡(jiǎn)介：臺(tái)盼藍(lán)（Trypan Blue），一種偶氮、親水性酸性藍(lán)色染料，可透過(guò)死亡細(xì)胞和垂死細(xì)胞的細(xì)胞膜，將其染成藍(lán)色，而活細(xì)胞由于其細(xì)胞膜的完整性，可將臺(tái)盼藍(lán)排斥在外，因此，通過(guò)顏色的變化即可將活細(xì)胞（活細(xì)胞呈透明無(wú)色）和死細(xì)胞鑒別開(kāi)來(lái)，基于此原理，本品廣泛用于細(xì)胞活性水平的常規(guī)評(píng)估。臺(tái)盼藍(lán)還可染色膠原和淀粉樣蛋白。臺(tái)盼藍(lán)與蛋白結(jié)合形成的復(fù)合物可發(fā)出紅色熒光。另外，臺(tái)盼藍(lán)（合適濃度）還常用來(lái)淬滅細(xì)胞表面的自熒光或者其他熒光信號(hào)。

本品為溶于生理鹽溶液的0.4%（w/v）臺(tái)盼藍(lán)染色液，以無(wú)菌形式提供，細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)別。


使用方法：
1.對(duì)于懸浮細(xì)胞，離心收集細(xì)胞，充分清洗后，用適當(dāng)緩沖液如PBS，HBSS重懸制成單細(xì)胞懸液；對(duì)于貼壁細(xì)胞，先用胰酶消化細(xì)胞，再按照懸浮細(xì)胞的方法制備單細(xì)胞懸液。

2.取0.5ml單細(xì)胞懸液，按照:比例與0.5ml 0.4%臺(tái)盼藍(lán)染色液充分混勻，室溫染色3~0min。
【注】：因臺(tái)盼藍(lán)具有細(xì)胞毒性，染色時(shí)間過(guò)久會(huì)導(dǎo)致部分死細(xì)胞染色，干擾計(jì)數(shù)。
【注2】：若細(xì)胞密度比較高，可取0.2ml單細(xì)胞懸液，經(jīng)適當(dāng)緩沖液稀釋到0.5ml，之后再用0.5ml 0.4%臺(tái)盼藍(lán)染色液染色。

3.取少量上述染色細(xì)胞加入血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，于顯微鏡低倍鏡下計(jì)數(shù)，分別計(jì)算著色細(xì)胞（即損傷細(xì)胞和死細(xì)胞）和總細(xì)胞。
【注】：用移液槍加染色細(xì)胞時(shí)，沿著蓋玻片的邊緣輕輕加液使其完全覆蓋住整個(gè)小室。不可過(guò)量加液或者不足量。
【注2】：mm2方格內(nèi)細(xì)胞數(shù)通?？刂圃?0-50 cells，當(dāng)細(xì)胞數(shù)超過(guò)200個(gè)，需重新調(diào)整稀釋倍數(shù)。

4.按照以下公式來(lái)計(jì)算細(xì)胞數(shù)目和活細(xì)胞百分比，
a，計(jì)算每ml細(xì)胞數(shù)目：Cells/ml=mm2大方格內(nèi)的平均細(xì)胞數(shù)×稀釋倍數(shù)×04；
【注】：此時(shí)的稀釋倍數(shù)為：步驟2所取的單細(xì)胞懸液與臺(tái)盼藍(lán)染色液混合后的稀釋倍數(shù)
b，總細(xì)胞數(shù)目：Total cells=（Cells/ml）×最初制備單細(xì)胞懸液的總體積
c，細(xì)胞活力值：Viability（%）=（總細(xì)胞數(shù)-總著色細(xì)胞數(shù)）/總細(xì)胞數(shù)×00
【注】：通常情況，健康的對(duì)數(shù)期培養(yǎng)細(xì)胞，活細(xì)胞至少占到95%。

注意事項(xiàng)：
1、懸浮細(xì)胞用此法時(shí)必須經(jīng)離心后才能吸出上清再加DMSO。
2、Formazan 的生成不僅與活細(xì)胞數(shù)成比例，也受作用時(shí)間的影響，因此當(dāng)樣品較多時(shí)測(cè)定的OD 值可能隨時(shí)間而變。
3、MTT 溶液為黃色，需避光保存，長(zhǎng)時(shí)間光照會(huì)導(dǎo)致失效。當(dāng)顏色變?yōu)榛揖G色時(shí)，請(qǐng)勿使用。MTT 溶液在4℃或較低溫度情況下會(huì)凝固，可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。
4、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。