細(xì)胞自噬染色檢測試劑盒(MDC法)操作步驟

產(chǎn)品名稱：細(xì)胞自噬染色檢測試劑盒(MDC法)
儲存條件：-20℃，避光，有效期12個(gè)月
用途：檢測細(xì)胞自噬


簡介：自噬(autophagy)是細(xì)胞受到刺激后吞噬自身的細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞器，最終將吞食物在溶酶體內(nèi)降解的過程，自噬體(autophagosome)為雙層膜包被的圓形或橢圓形結(jié)構(gòu)，內(nèi)含細(xì)胞質(zhì)、長壽蛋白質(zhì)和異常蛋白聚集物，損傷或多余細(xì)胞器如線粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和微體、病毒和細(xì)菌等。單丹磺酰尸胺(Dansylcadaverine,MDC+)是一種熒光色素，是嗜酸性染色劑，通常被用于檢測自噬體形成的特異性標(biāo)記染色劑，其檢測激發(fā)濾光片波長355nm。阻斷濾光片波長512nm。細(xì)胞自噬染色檢測試劑盒(MDC法)，適用于培養(yǎng)細(xì)胞的自噬染色，又稱為MDC染色液，可與EB合用雙染。


操作步驟(僅供參考)：
(一)、MDC單獨(dú)染色：
1、用去離子水稀釋1×Wash+buffer至1×。
2、離心，收集細(xì)胞，用1×Wash+buffer清洗細(xì)胞1次，棄上清。
3、加入適量的1×Wash+buffer重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)并調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度至106/ml。
4、取適量細(xì)胞懸液至新的EP管中，加入MDC+Stain，輕輕混勻。
5、室溫避光染色。
6、離心收集細(xì)胞，用1×Wash+buffer清洗細(xì)胞2次，棄上清。
7、加入Collection+buffer重懸細(xì)胞，滴加于載玻片上并加蓋玻片。
8、熒光顯微鏡下觀察(激發(fā)濾光片波長355nm，阻斷濾光片波長512nm)，計(jì)數(shù)并拍照。


(二)、與EB雙染色：
1、用去離子水稀釋1×Wash+buffer至1×。
2、離心收集細(xì)胞，用1×Wash+buffer清洗細(xì)胞1次，棄上清。
3、加入適量的1×Wash+buffer重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)并調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度至106/ml。
4、取適量細(xì)胞懸液至新的EP管中，分別加入MDC+Stain和EB染色液，輕輕混勻。
5、滴加于在玻片上，室溫避光染色，加蓋玻片。
6、熒光顯微鏡下觀察(激發(fā)濾光片波長512nm)，計(jì)數(shù)并拍照。

染色結(jié)果：
正常細(xì)胞   細(xì)胞被均勻染成黃綠色細(xì)胞
凋亡細(xì)胞   染色質(zhì)濃縮，細(xì)胞核碎裂成點(diǎn)狀，被染成大小不一、致密濃染的綠色顆粒


注意事項(xiàng)：
1、MDC Stain和EB，試劑有一定毒性，請小心操作。
2、吖啶橙染色常與EB染色合用，可區(qū)分出正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞。
3、操作過程中應(yīng)注意減少試劑暴露于強(qiáng)光下的時(shí)間。
4、為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。