細(xì)胞凋亡-Hoechst染色試劑盒詳細(xì)說明書

產(chǎn)品名：細(xì)胞凋亡-Hoechst染色試劑盒
規(guī)    格：100T
用    途：快速簡便的細(xì)胞凋亡檢測
注意事項：由固定液、染色液、熒光封片劑組成,貼壁細(xì)胞,適用于懸浮細(xì)胞和組織切片。
儲存條件：—20℃,避光,12個月


產(chǎn)品說明：細(xì)胞凋亡-Hoechst染色試劑盒(HoechstStainingKit)是一種采用經(jīng)典的Hoechst33258進(jìn)行細(xì)胞凋亡檢測的快速簡便的試劑盒。當(dāng)細(xì)胞發(fā)生凋亡時，染色質(zhì)會固縮，Hoechst33258染色后在熒光顯微鏡下觀察，正常細(xì)胞的細(xì)胞核呈正常的藍(lán)色，而凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核會呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染，顏色有些發(fā)白。HoechstStainingKit經(jīng)常用于培養(yǎng)的貼壁或懸浮細(xì)胞以及組織切片的細(xì)胞凋亡檢測。該試劑盒檢測細(xì)胞含量范圍一般為0.1～1×106之間。

自備材料：
1、可觀察藍(lán)光的熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡
2、PBS或生理鹽水
3、載玻片、蓋玻片
4、預(yù)冷固定液：預(yù)冷的70%乙醇或4%多聚甲醛

操作步驟(僅供參考)：
(一)貼壁細(xì)胞
1、取潔凈蓋玻片在70%乙醇中浸泡5min或更長時間，無菌超凈臺內(nèi)吹干或用無菌的PBS或生理鹽水洗滌3次，再用細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌1次。將蓋玻片置于6孔板或其他培養(yǎng)皿內(nèi)，接種細(xì)胞培養(yǎng)過夜，使融合率約為50%～80%。
2、加入干預(yù)條件使細(xì)胞發(fā)生凋亡后，吸盡培養(yǎng)液，加入Hoechst固定液0.5ml，固定10min或更長時間(可4℃過夜)。
3、去除固定液，用PBS或生理鹽水洗2次，每次3min，吸盡液體。洗滌時宜用搖床，或手動晃動。
4、加入Hoechst33258染色液0.5ml，孵育5min。也宜用搖床，或手動晃動數(shù)次。
5、棄染色液，用PBS或生理鹽水洗2次，每次3min，吸盡液體。洗滌時宜用搖床，或手動晃動。
6、滴一滴抗熒封片劑于載玻片上，蓋上貼有細(xì)胞的蓋玻片，讓細(xì)胞接觸封片劑，盡量避免氣泡。
7、熒光顯微鏡可檢測到呈藍(lán)色的細(xì)胞核。激發(fā)波長350nm左右，發(fā)射波長460nm左右。

(二)懸浮細(xì)胞
1、離心收集細(xì)胞樣品于1.5ml離心管內(nèi)并棄液，加入Hoechst固定液0.5ml，緩緩懸起細(xì)胞，固定10min或更長時間(亦可4℃過夜)。
2、低速離心去除固定液，用PBS或生理鹽水洗2次，每次3min。洗滌時手動晃動數(shù)次。
3、低速離心離心后吸去大部分液體保留約50μl液體，再緩緩懸起細(xì)胞，滴加至載玻片上，盡量使細(xì)胞分布均勻。
4、稍晾干，使細(xì)胞貼在載玻片上不易隨液體流動。
5、滴加Hoechst33258染色液0.5ml，孵育5min。用吸水紙從邊緣吸去液體，微晾干。
6、棄染色液，用PBS或生理鹽水洗2次，每次3min，吸盡液體。洗滌時宜用搖床，或手動晃動。
7、滴一滴抗熒光封片劑于載玻片上，蓋上一潔凈的蓋玻片，盡量避免氣泡。
8、熒光顯微鏡可檢測到呈藍(lán)色的細(xì)胞核。激發(fā)波長350nm左右，發(fā)射波長460nm左右。

(三)組織切片
1、常規(guī)包埋切片。
2、用PBS或生理鹽水洗2次，每次3min。洗滌時手動晃動數(shù)次。
3、均勻滴上Hoechst33258染色液0.5ml，孵育5分鐘。
4、棄染色液，用PBS或生理鹽水洗2次，每次3min，吸盡液體。洗滌時宜用搖床，或手動晃動。
5、將切片置于載玻片上，滴一滴抗熒光封片劑，蓋上一潔凈的蓋玻片，盡量避免氣泡。
6、熒光顯微鏡可檢測到呈藍(lán)色的細(xì)胞核。激發(fā)波長350nm左右，發(fā)射波長460nm左右。

注意事項：
1、熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡快檢測。使用抗熒光封片劑時也應(yīng)避光操作。
2、在為了獲得細(xì)胞沉淀的離心的過程中，對于特殊細(xì)胞，如果細(xì)胞沉淀不充分，可以適當(dāng)提高離心力或延長離心時間。
3、Hoechst33258染色液對人體有一定刺激性，請注意適當(dāng)防護(hù)。
4、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。