細(xì)胞爬片、甩片的制備方法

(一)細(xì)胞爬片的制備

(1)如果使用載玻片或蓋玻片，必須在使用之前滅菌。可以一次滅菌并貯存在無(wú)菌狀態(tài)下。如果使用少量的蓋玻片，用金屬鑷子夾住蓋玻片，在70%乙醇中浸泡，然后在火焰上烤干。要輕輕地鑷取，以防破裂。為了方便起見(jiàn)，可以將蓋玻片浸泡于70%的乙醇中，使用時(shí)放在火焰上處理。如果使用的蓋玻片或載玻片數(shù)量較多，可以將它們放于專用的金屬支架上，然后高壓消毒。如果需要的數(shù)量更大，則可將其放在耐熱的容器中，干烤2小時(shí)。

(2)在無(wú)菌狀態(tài)下，把干燥的玻片放于適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)皿中。蓋玻片可以用金屬鑷子鑷取，圓形蓋玻片可以放在24孔培養(yǎng)板的孔中，直徑90mm的培養(yǎng)皿能夠放入10-15張蓋玻片，或者放入一張標(biāo)準(zhǔn)的載玻片。

(3)將懸浮的細(xì)胞放入組織培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)至少24小時(shí)，讓細(xì)胞貼附在玻片上。要想得到一個(gè)較好的結(jié)果，在加細(xì)胞時(shí)，密度應(yīng)低，以防細(xì)胞密度過(guò)高。

(4)如果細(xì)胞數(shù)目有限，可把細(xì)胞懸液直接滴在玻片上，靜置4小時(shí)后再輕輕加入培養(yǎng)液。通過(guò)這種方式，大部分細(xì)胞將粘附于玻片上，然后再培養(yǎng)約24小時(shí)，使細(xì)胞適當(dāng)擴(kuò)增。此時(shí)，取出載玻片或蓋玻片可進(jìn)行固定。

(二)細(xì)胞甩片的制備

(1)用PBS洗滌細(xì)胞(400×g離心5min)，并重懸于PBS中。調(diào)整濃度至1×106 /ml～2×106 /ml；

(2)將載玻片固定于甩片機(jī)的轉(zhuǎn)頭上，然后加入0.1ml細(xì)胞懸液；

(3)迅速使離心力達(dá)到1200×g，離心5～10min； (4)使玻片上單層細(xì)胞在空氣中干燥15～20min。此時(shí)，細(xì)胞可進(jìn)行固定。