細菌簡單染色實驗方法

簡單染色法是利用單一染料對細菌進行染色的一種方法。此法操作簡便，適用于菌體一般形狀和細菌排列的觀察。


實驗方法原理：
常用堿性染料進行簡單染色，這是因為：在中性、堿性或弱酸性溶液中，細菌細胞通常帶負電荷，而堿性染料在電離時，其分子的染色部分帶正電荷（酸性染料電離時，其分子的染色部分帶正電荷）。因此堿性染料的染色部分很容易與細菌結(jié)合使細菌著色。經(jīng)染色后的細菌細胞與背景形成鮮明的對比，在顯微鏡下更易于識別，常用作簡單染色的染料有：美藍、結(jié)晶紫、堿性復(fù)紅等。
當細菌分解糖類產(chǎn)酸使培養(yǎng)基 pH 下降時，細菌所帶正電荷增加，此時可用伊紅、酸性復(fù)紅或剛果紅等酸性染料染色。


實驗材料 ：
枯草芽孢桿菌 （12-18 h 營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物） 藤黃微球菌（約 24 h 營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物）
試劑、試劑盒 ：
呂氏堿性美藍染液／草酸按結(jié)晶紫染液 齊氏石炭酸復(fù)紅染液
儀器、耗材 ：
顯微鏡 酒精燈 載玻片 接種環(huán) 雙層瓶（內(nèi)裝香柏油和二甲苯） 擦鏡紙 生理鹽水


實驗步驟：
1. 涂片
取兩塊載玻片，各滴一小滴（或用接種環(huán)挑取 1~2 環(huán)）生理鹽水（或蒸餾水）于玻片中央，用接環(huán)以無菌操作（圖 IV-1）分別從枯草芽泡桿菌和藤黃微球菌斜面上挑取少許菌苔于水滴中，混勻井涂成薄膜。若用菌懸液（或液體培養(yǎng)物）涂片可用接種環(huán)挑取 2~3 環(huán)直接涂于載玻片上。
2. 干燥
室溫自然干燥。
3. 固定
涂面朝上，通過火焰 2~3 次。
此操作過程稱熱固定，其目的是使細胞質(zhì)凝固，以固定細胞形態(tài)。并使之牢固附著在載玻片上。
4. 染色
將玻片平放于玻片擱架上，滴加染液于涂片上（染液剛好覆蓋涂片薄膜為宜）。呂氏堿性美藍染色 1~2 min，石炭酸復(fù)紅（或草酸銨結(jié)晶紫）染色約 1 min。
5. 水洗
倒去染液。用自來水沖洗，直至涂片上流下的水無色為止。
6. 干燥
自然干燥，或用電吹風(fēng)吹干，也可用吸水紙吸干。
7. 鏡檢
涂片干后鏡檢。


注意事項：
1. 載玻片要潔凈無油斑，滴生理鹽水和取菌不宜過多，涂片要涂抹均勻。不宜過厚。
2. 熱固定溫度不宜過高（以玻片背面不燙手為宜），否剿會改變甚至破壞細胞形態(tài)。
3. 水洗時不要直接沖洗涂面，而應(yīng)使水從載玻片的一端流下。水流不宜過急、過大，以免涂片薄膜脫落。
4. 涂片必須完全干燥后才能用油鏡觀察。