{  激發(fā)波長為488 nm的熒光素 }

1. 異硫氰酸熒光素（fluorescein isothiocyanate，F(xiàn)ITC）：FITC是應(yīng)用最為廣泛的一種熒光素，經(jīng)激光激發(fā)后發(fā)出明亮的黃綠色熒光，最大發(fā)射波長為525 nm。FITC的熒光強(qiáng)度受PH影響較大，常隨著PH的降低而減弱，因此，在使用FITC時(shí)需格外注意溶液的酸堿度。

2. Alexa Fluor 488：Alexa Fluor是美國分子探針公司開發(fā)的系列熒光染料，Alexa Fluor 488的發(fā)射光譜與FITC幾乎一致，經(jīng)激光激發(fā)后發(fā)出綠色熒光，最大發(fā)射波長為519 nm，但其熒光強(qiáng)度和穩(wěn)定性要優(yōu)于FITC。一般來說，Alexa Fluor 488在pH 4-10范圍內(nèi)能保持較好的光穩(wěn)定性。

3. 藻紅蛋白（phycoerythrin，PE）：PE是從紅藻中分離純化獲得的一種常見染料，經(jīng)激光激發(fā)后發(fā)出橙黃色熒光，最大發(fā)射波長為575 nm。PE具有吸光性能好和光量子產(chǎn)率高的特點(diǎn)，可用于標(biāo)記表達(dá)水平較低的蛋白。在流式細(xì)胞術(shù)檢測中，PE標(biāo)記的抗體適用于所有配備488 nm氬離子激光器的流式細(xì)胞儀。

4. PE-Cy5：PE-Cy5是一種復(fù)合染料，屬于藻紅蛋白偶聯(lián)物，在此類復(fù)合染料中，激發(fā)能量可從PE傳遞到Cy5上，最大發(fā)射波長為667 nm。由于PE-Cy5與FITC、PE在光譜上重疊范圍較少，熒光干擾少，因此實(shí)驗(yàn)中常將PE-Cy5與FITC、PE搭配使用。需注意，PE-Cy5不適合與APC搭配使用，兩者熒光重疊大。

5. PE-Cy5.5：PE-Cy5.5也是一種復(fù)合染料，能量從PE傳遞到Cy5.5上，最大發(fā)射波長為694 nm。同PE-Cy5不一樣，PE-Cy5.5與FITC、PE、APC間熒光干擾小，可搭配使用，且其熒光強(qiáng)度要優(yōu)于PE-Cy5。

6. PE-Cy7：復(fù)合染料，最大發(fā)射波長為785 nm。PE-Cy7與FITC無光譜重疊，與APC重疊也較少，因此其可與FITC、PE、APC搭配使用。在實(shí)驗(yàn)中需要注意，PE-Cy7的光淬滅性很強(qiáng)，需要絕對(duì)避光環(huán)境。

7. PerCP-Cy5.5：復(fù)合染料，最大發(fā)射波長為695 nm。與PerCP相反，PerCP的光量子產(chǎn)率較低，適用于表達(dá)水平較高物質(zhì)的檢測，PerCP-Cy5.5光量子產(chǎn)率高，可用于表達(dá)水平較低物質(zhì)的檢測。在雙激光管儀器上與APC共同檢測時(shí)，需要做補(bǔ)償調(diào)節(jié)，但比PerCP補(bǔ)償少。

8. PI/7-AAD：碘化丙啶（propidium iodide，PI）和7-AAD（7-amino-actinomycin D）的最大發(fā)射波長分別為617 nm和647 nm，是常見的熒光染料，常用于細(xì)胞凋亡檢測，可用于鑒別死、活細(xì)胞。在大部分流式細(xì)胞儀上，PI在FL2或FL3通道檢測，7-AAD在FL3通道檢測。7-AAD同PI 有著相似的熒光特性，但其發(fā)射波譜較PI窄，對(duì)其他檢測通道的干擾更小，在多色熒光分析中是PI的最佳替代品。

{  激發(fā)波長為633 nm的熒光素 }

1. 別藻青蛋白（allophycocyanin，APC）：APC最大發(fā)射波長為660 nm，其標(biāo)記的抗體適用于所有配備氦氖激光器的流式細(xì)胞儀，檢測通道一般是FL4通道。FITC、PE和APC搭配是經(jīng)典3色搭配。

2. Cy5：Cy5屬于小分子染料，其最大發(fā)射波長為670 nm，其標(biāo)記的抗體適用于所有配備633 nm氬離子激光器的流式細(xì)胞儀，檢測通道一般是FL4通道。除流式細(xì)胞術(shù)外，Cy5同樣適用于傳統(tǒng)的熒光顯微鏡技術(shù)。需注意的是，Cy5與單核細(xì)胞和粒細(xì)胞的非特異性結(jié)合多，實(shí)驗(yàn)結(jié)果容易出現(xiàn)假陽性。

3. Alexa Fluor 647：Alexa Fluor 647是一種明亮的紅色熒光染料，其最大發(fā)射波長為668 nm，一般在流式細(xì)胞儀的FL4通道檢測。Alexa Fluor 647具有熒光量子產(chǎn)率高、光穩(wěn)定性好、適宜的pH范圍廣和不易淬滅等特點(diǎn)，是APC和Cy5的優(yōu)質(zhì)替代品。

{  常用熒光素及相應(yīng)檢測通道 }

注：不同型號(hào)流式細(xì)胞儀的各檢測通道對(duì)熒光素的檢測能力是不同的，上表僅為較常見情況，具體檢測通道可檢測熒光素的信息以流式細(xì)胞儀配置為準(zhǔn)。