遠慕生物：常用的檢測核酸的方法

    Picogreen是一種極為靈敏的熒光核酸染料，常用于雙鏈DNA的定量檢測。歷來DNA濃度的測定在cDNA文庫的構(gòu)建，DNA亞克隆、PCR產(chǎn)物的估測等領(lǐng)域中具有重要意義。疫苗等生物制品中殘留微量DNA的檢測更是直接關(guān)系到人類的健康。

    常用的檢測核酸的方法有:

    1）紫外吸光法（A260），該法操作簡便，但DNA樣品中核苷酸、單鏈DNA、RNA和蛋白質(zhì)對紫外吸收信號影響很大，還容易受到核酸樣品中污染物的干擾，不能區(qū)分DNA和RNA，而且靈敏度低（ΔA260=0.1相當于5ug/ml的dsDNA）；

    2）探針雜交法，該法是傳統(tǒng)檢測微量DNA的常用方法，基本能滿足目前疫苗和治療性生物制品的檢測需求，但是該法耗時較長，操作繁瑣，穩(wěn)定性、敏感性和特異性較差；

    3）Hoechst33258染料法，Hoechst33258是一種一定程度上特異于雙鏈DNA的核酸染料，基本不受蛋白質(zhì)的干擾，可以檢測低至10ng/ml的DNA；在檢測穩(wěn)定性和靈敏度上仍達不到理想效果。

    Picogreen dsDNA定量法：Picogreen僅在與DNA雙鏈結(jié)合后才發(fā)出熒光，且所產(chǎn)生的熒光與DNA濃度呈正比，在存在ssDNA、RNA和單體核苷酸的條件下，可以選擇性地檢測低至25pg/ml的dsDNA。該分析在三個數(shù)量級范圍內(nèi)呈線性，且?guī)缀鯚o序列依賴性，可以精確地測量多個來源的DNA，包括基因組DNA、病毒DNA、小量提取DNA或PCR擴增產(chǎn)物。

    相比傳統(tǒng)的方法，Picogreen dsDNA Quantitation Reagent定量具有以下優(yōu)勢：

    ①靈敏度高：數(shù)量級較UV吸光讀數(shù)更敏感，可節(jié)省寶貴的樣品；

    ②特異性強：在等摩爾的RNA存在的條件下，對dsDNA具有特異性；

    ③耐受性好：耐受較高濃度的鹽、尿素、乙醇、氯仿、去垢劑、蛋白或瓊脂糖，可以直接定量PCR擴增產(chǎn)物而無需從反應混合物中純化DNA。

    ④易于使用——只需在樣品中加入染料，等待5分鐘，然后讀數(shù)即可，且適用于96和384孔板；與大多數(shù)基于熒光的酶標儀和熒光計兼容。

    ⑤適用范圍廣：可適用于PCR的分析、芯片樣品、DNA損傷分析、酶活性分析、基因組DNA定量以及復雜混合物中dsDNA的檢測和病毒DNA定量等多種領(lǐng)域。

    若每次分析體積為2 mL，1ml Picogreen定量試劑足夠200次分析使用，若使用微孔板或96孔板檢測，每次使用量200μl，則足夠2000次分析。另外，我公司提供【雙鏈DNA（dsDNA）定量檢測試劑盒】方便客戶選用。

    儲存條件：4℃避光干燥，有效期6個月。

    注意事項

    1）Picogreen定量試劑含有DMSO（已知有毒試劑），請小心操作；

    2）盡管目前尚未有數(shù)據(jù)表明Picogreen具有誘變性和毒性，但是該試劑能結(jié)合雙鏈DNA，請操作時務必小心。