目前我國細(xì)胞培養(yǎng)器皿主要仍使用能反復(fù)使用的玻璃器皿,清洗的主要目的為清除雜質(zhì)和微生物,使在器皿內(nèi)不殘留任何影響細(xì)胞生長的成份。因而在組織細(xì)胞培養(yǎng)中清洗和消毒是一項極為重要的環(huán)節(jié)。
(一) 清洗
在組織細(xì)胞培養(yǎng)中,體外細(xì)胞對任何有害物質(zhì)都非常敏感。微生物產(chǎn)品附帶雜物,上次細(xì)胞殘留物及非營養(yǎng)成分的化學(xué)物質(zhì),均能影響培養(yǎng)細(xì)胞的生長。因此對新使用和重新使用的培養(yǎng)器皿都要嚴(yán)格徹底的清洗,且要根據(jù)器皿的組成材料不同,選擇不同的清洗方法。
1、玻璃器皿的清洗
組織細(xì)胞培養(yǎng)中,使用量最大的是玻璃器皿,故工作最最大的是玻璃器皿的清洗。一般玻璃器皿的清洗包括浸泡、刷洗、侵酸和沖洗四個步驟。清洗后的玻璃器皿僅要求干凈透明無油跡,而且不能殘留任何物質(zhì)。
(1)浸泡:初次使用和培養(yǎng)使用后的玻璃器皿均需先用清水浸泡,以使附著物軟化或被溶液掉。新的初次使用的玻璃器皿,在生產(chǎn)及運輸過程中,玻璃表面帶有大量的干固的灰塵,且玻璃表面常呈堿性及帶有一些對細(xì)胞有害的物質(zhì)等。新瓶使用前應(yīng)先用自來水簡單刷洗,然后用稀鹽酸液浸泡過夜,以中和其中的堿性物質(zhì)。再次使用的玻璃器皿則常附有大量剛使用過的蛋白質(zhì),干固后不易洗掉,故用后要立即浸入水中,且要求完全浸入,不能留有氣泡或浮在液面上。
(2)刷洗:浸泡后的玻璃器皿一般要用毛刷沾洗滌劑刷洗,以除去器皿表面附著較牢的雜質(zhì)。刷洗要適度,過度會損害器皿表面光澤度。
(3)浸酸:清潔液是由zhongluosuanjia、濃硫酸和蒸餾水按一定比例配制而成,其處理過程稱為浸酸。清潔液對玻璃器皿無腐蝕作用,而其強氧化作用可除掉刷洗不掉的微量雜質(zhì)。清潔液去污能力很強。是清洗過程中關(guān)鍵的一環(huán)。浸泡時器皿要充滿清潔液,勿留氣泡或器皿露出清潔液面。浸泡時間一般為過夜,不應(yīng)少于6小時。 清潔液可根據(jù)需要,配制成不同的強度,常用的下列三種: zhongluosuanjia(g) 濃硫酸(ml) 蒸餾水(ml) (A)強清潔液 63 1000 200000 B)次強清洗液 120 200 1000 (C)弱清潔液 100 100 100 。
清潔液配制時應(yīng)注意安全,須穿戴耐酸手套和圍裙,并要保護好面部及身體裸露部分。配制過程中可使zhongluosuanjia溶于水中,然后慢慢加濃硫酸。并不停的用玻璃棒攪拌,使產(chǎn)生的熱量揮發(fā),配制過程中可使zhongluosuanjia溶于水中,然后慢慢加濃硫酸。并不停的用玻璃棒攪拌,使產(chǎn)生的熱量揮發(fā),配制溶液應(yīng)選擇塑料制品。配成后清潔液一般為棕紅色。
(4)沖洗:玻璃器皿在使用后,刷洗及浸泡后都必須用水充分沖洗。使之盡量不留污染或潔液的殘跡。沖洗最好用洗滌裝置。即省力、效果又好。如用手工操作,則需流水沖洗十次以上,每天水須灌滿及倒干凈,最好用蒸餾水清洗3-5次,晾干備用。