歡迎大家來(lái)到-細(xì)胞培養(yǎng)知識(shí)小課堂

今天我們要講的是細(xì)胞”急救員”

---抗生素

細(xì)菌會(huì)使我們的細(xì)胞變得羸弱不堪直至死亡

抗生素成為了細(xì)胞的大救星

最早的抗生素-青霉素（Penicillin）是微生物學(xué)家弗萊明于自然界中發(fā)現(xiàn)的一種抗菌物質(zhì)；至今，許多專(zhuān)家以合成或半合成的方式發(fā)明了更多種類(lèi)的抗生素，用來(lái)對(duì)抗不同種類(lèi)的細(xì)菌。

如下圖：

▲細(xì)胞污染圖

抗菌法可簡(jiǎn)單分為5大類(lèi)：

抑制微生物細(xì)胞壁合成

阻礙細(xì)菌細(xì)胞壁的合成，導(dǎo)致細(xì)菌在低滲透壓環(huán)境下溶脹破裂死亡，因哺乳動(dòng)物細(xì)胞無(wú)細(xì)胞壁，不受此類(lèi)藥物影響，因而此類(lèi)抗生素普遍細(xì)胞毒性較小。

如：β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素（Beta-lactam Antibiotic）為此原理

破壞細(xì)胞膜功能

與細(xì)菌細(xì)胞膜相互作用，增強(qiáng)細(xì)菌細(xì)胞膜的通透性，打開(kāi)膜上的離子通道，讓細(xì)菌內(nèi)部有用物質(zhì)漏出菌體或電解質(zhì)平衡失調(diào)而死。

如：多粘菌素（Polymyxin），達(dá)托霉素（Daptomycin）等為此類(lèi)抗生素

抑制遺傳物質(zhì)的復(fù)制及轉(zhuǎn)錄

阻礙DNA復(fù)制，抑制細(xì)菌分裂繁殖；或阻礙DNA轉(zhuǎn)錄mRNA，使后續(xù)mRNA翻譯蛋白的過(guò)程受阻。

如：喹諾酮類(lèi)（Quinolones），利福平（Rifampin）等為此類(lèi)抗生素

抑制蛋白合成

與細(xì)菌核糖體或tRNA相互作用，抑制細(xì)胞存活所需的結(jié)構(gòu)蛋白和酶等蛋白質(zhì)合成進(jìn)而殺死或抑制細(xì)菌生長(zhǎng)。

如：鏈霉素（Streptomycin），新霉素（Neomycin），慶大霉素（Gentamicin），卡那霉素（Kanamycin）等為此類(lèi)抗生素

影響微生物代謝功能

細(xì)菌會(huì)產(chǎn)生葉酸并以此為養(yǎng)料，此類(lèi)藥物阻斷細(xì)菌葉酸合成，進(jìn)一步使細(xì)菌因葉酸不足而死亡。

如：甲氧芐啶（Trimethoprim），磺酰胺（Sulfonamides）等為此類(lèi)抗生素

▲抗菌原理圖

又可根據(jù)功效分為兩類(lèi)：

抑菌性（Bacteriostatic）抗生素

無(wú)法直接殺死微生物，但能控制微生物增長(zhǎng)速度，大多為抑制細(xì)胞壁或蛋白質(zhì)合成的抗生素。

殺菌型（Bactericidal）抗生素

可直接破壞微生物本身，大多以破壞細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，阻礙遺傳物質(zhì)復(fù)制或影響代謝功能而導(dǎo)致菌體死亡。

純抑菌型抗生素大多用于臨床治療，抑制病患體內(nèi)細(xì)菌的生長(zhǎng)速度，等待病患的免疫系統(tǒng)清除已存在的菌體，然而，體外細(xì)胞培養(yǎng)并沒(méi)有免疫系統(tǒng)能幫助我們殺死菌體，所以大多數(shù)使用殺菌型抗生素來(lái)嘗試清除細(xì)菌；但多種抗生素在低濃度的狀況下為抑菌性，在高濃度狀況下則有殺菌效果（轉(zhuǎn)為殺菌型，如青霉素），因此實(shí)驗(yàn)中“預(yù)防性使用”或“補(bǔ)救性使用”上濃度會(huì)有調(diào)整，所以大家在購(gòu)入使用抗生素前，記得仔細(xì)閱讀產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)，也可咨詢(xún)?cè)摦a(chǎn)品技術(shù)支持噢。

遠(yuǎn)慕生物也為大家總結(jié)一些使用抗生素時(shí)的問(wèn)題，我們一起來(lái)看看吧~

Q：青霉素（Penicillin）、鏈霉素（Streptomycin）的抑菌原理是什么？

A：青霉素通過(guò)抑制細(xì)菌細(xì)胞壁四肽側(cè)鏈和五肽交連橋的結(jié)合而阻礙細(xì)胞壁合成并發(fā)揮殺菌作用，對(duì)革蘭陽(yáng)性菌有效，但革蘭陰性菌缺乏五肽交連橋，因此青霉素對(duì)其作用不大。鏈霉素作用于細(xì)菌體內(nèi)的核糖體，抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)合成，對(duì)革蘭陰性菌有效。青鏈雙抗 (Penicillin-Streptomycin Solution, Cat#：03-031-1B)聯(lián)合抑制細(xì)菌，可以有效殺滅G+、G-菌。

Q：青鏈制真菌素三抗溶液（Penicillin-Streptomycin Nystatin Solution, Cat#：03-032-1B），融解后會(huì)有黃色物質(zhì)析出，屬于正?，F(xiàn)象嗎？

A：三抗本身是濃縮溶液，制真霉素在高濃度飽和狀態(tài)水溶性差會(huì)被析出呈黃色物質(zhì)，溶液外觀略顯渾濁，屬于正?，F(xiàn)象，客戶(hù)可以放心使用。

Q：原代細(xì)胞里加雙抗或者三抗，會(huì)不會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)？

A：分離原代細(xì)胞初期，為了避免造成污染，一般會(huì)建議預(yù)防性加入適量雙抗或者三抗，適量的抗生素用量對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)幾乎沒(méi)有影響，可以在細(xì)胞培養(yǎng)穩(wěn)定后降低或移除抗生素。

Q：支原體處理試劑如何使用？

A：因支原體無(wú)細(xì)胞壁，故BI已開(kāi)發(fā)全套支原體殺除試劑，可按說(shuō)明書(shū)使用，如下。

BIOMYC-1和BIOMYC-2的使用方法：加1ml的BIOMYC-1溶液至100ml培養(yǎng)基中，保持受污染的細(xì)胞在混合液中培養(yǎng)4天。期間需加入含BIOMYC-1溶液的少許的新培養(yǎng)基；4天后換液，加1ml BIOMYC-2溶液至100ml的新培養(yǎng)基中，并維持培養(yǎng)3天；以上是一個(gè)處理循環(huán)階段，必要時(shí)可繼續(xù)2－3次如上處理循環(huán)。在處理過(guò)程中，細(xì)胞需用來(lái)做支原體污染檢測(cè)，以確認(rèn)效果，從而適當(dāng)減少實(shí)驗(yàn)過(guò)程。

BIOMYC-3的使用方法：加1ml BIOMYC-3至100ml培養(yǎng)基中；持續(xù)培養(yǎng)14天，期間每2-3天更換一次培養(yǎng)基。在檢測(cè)支原體前，請(qǐng)保持細(xì)胞在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中多維持14天。

Q：支原體預(yù)防試劑如何使用？

A：Aquaguard-1的建議濃度：1：100 無(wú)菌水稀釋。CO₂ 培養(yǎng)箱使用的水是重要的污染源，將50ml Aquaguard-1溶液加至5L水中，每2-4周更換一次培養(yǎng)箱中的無(wú)菌水。

Aquaguard-2的建議濃度：1：500 無(wú)菌水稀釋。將2ml的Aquaquard-2濃縮液加入到1L水中，放置于水浴鍋，建議1-2周更換一次。

Q：請(qǐng)問(wèn)如果培養(yǎng)基加入了支原體處理試劑的話，還需要再額外加抗生素嗎?

A：如果確認(rèn)支原體污染，可以不用考慮添加雙抗/三抗；如果是用于預(yù)防（一般細(xì)胞培養(yǎng)或是原代細(xì)胞分離），可以?xún)烧叨技印?/span>

Q：若培養(yǎng)箱污染，該如何處理？

A：先用酒精清潔擦拭，然后使用IC-110100滅菌噴壺噴灑消毒，可有效預(yù)防真菌（和孢子）、細(xì)菌（和孢子）、支原體和病毒的生長(zhǎng)和污染。Aquaquard-1（01-867-1B）是多功能性，即用型的濃縮溶液，將50ml Aquaguard-1溶液加至5L水中，加入培養(yǎng)箱的水盤(pán)。每2-4周更換一次培養(yǎng)箱中的無(wú)菌水。