免疫組化問(wèn)題,上海遠(yuǎn)慕一一為您解答

  時(shí)間沒(méi)有等我，是你忘了帶我走 ，我左手過(guò)目不忘的的螢火，右手里是十年一個(gè)漫長(zhǎng)的打坐。轉(zhuǎn)眼間暑假已經(jīng)開(kāi)始了， 免疫組化問(wèn)題，上海遠(yuǎn)慕一一為您解答

1、染色過(guò)強(qiáng)

原因及相關(guān)解決方法

a 抗體濃度過(guò)高或孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng) 降低抗體滴度、抗體孵育時(shí)間：室溫1小時(shí)或4度過(guò)夜

b 孵育溫度過(guò)高超過(guò)37度 一般在室溫20-28度

c DAB顯色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或濃度過(guò)高 顯色時(shí)間不超過(guò)5-12分鐘，以顯微鏡下觀察為準(zhǔn) 

2、非特異性背景染色

原因及相關(guān)解決方法

a 操作過(guò)程中沖洗不充分： 每步?jīng)_洗3次每次5分鐘

b 組織中含過(guò)氧化物酶未阻斷 ：可再配置新鮮3%H2O2封閉孵育時(shí)間延長(zhǎng)

c 組織中含內(nèi)原性生物素：正常非免疫動(dòng)物血清再封閉

d 血清蛋白封閉不充分：延長(zhǎng)血清蛋白封閉時(shí)間

3、染色弱

原因及相關(guān)解決方法 

a 抗體濃度過(guò)低、孵育時(shí)間過(guò)短：提高抗體濃度、孵育時(shí)間不能少 于60分鐘

b 試劑超過(guò)有效使用時(shí)間： 應(yīng)更換試劑

c 操作中添加試劑時(shí)緩沖液未瀝干 ：每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液

使試劑稀釋 （應(yīng)防止切片干燥）

d 室溫太低 ：低于15度要改放在37度孵育箱孵育30-60分鐘或4 度冰箱過(guò)夜

e 蛋白封閉過(guò)度：封閉不要超過(guò)12分鐘

4、染色陰性

原因及相關(guān)解決方法 

a 操作步驟錯(cuò)誤：應(yīng)重試設(shè)陽(yáng)性對(duì)照

b 組織中無(wú)抗原：設(shè)陽(yáng)性對(duì)照以驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

c 一抗與二抗種屬連接錯(cuò)誤：仔細(xì)確定一抗二抗種屬無(wú)誤

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