如何為您的實(shí)驗(yàn)選擇最適合的緩沖液那!

2019-01-07 10:11 來源：上海遠(yuǎn)慕生物試劑

在各種細(xì)胞、蛋白、DNA實(shí)驗(yàn)中，所有的組分都是傲嬌的寶寶，需要細(xì)心的呵護(hù)，否則一旦離開天然的生物環(huán)境，它就會(huì)變得捉摸不定，嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)成果。

要為他們提供好的天然環(huán)境，一定少不了緩沖液的身影，那么在眾多的緩沖液之中該如何選擇呢？
我們來捋一捋常用的生物緩沖液都有哪些，又各自有什么特點(diǎn)：

磷酸鹽緩沖液
磷酸鹽緩沖液是使用最為廣泛的一種緩沖劑，由于它有二級(jí)解離，所以緩沖的pH值范圍很廣，可配置各種pH值的酸性、堿性和中性緩沖液：
配制酸性緩沖液可直接用NaH2PO4或KH2PO4，pH范圍在1~5；
堿性緩沖液可直接用Na2HPO4或K2HPO4，pH范圍在9~12；
中性緩沖液則用等濃度的NaH2PO4和Na2HPO4或者等濃度的KH2PO4和K2HPO4溶液混合，pH在5.5~8.5。
磷酸鹽緩沖液優(yōu)點(diǎn)
易配成各種濃度
適用pH范圍寬
pH受溫度影響小
稀釋后pH變化小
磷酸鹽緩沖液缺點(diǎn)
易與常見的鈣離子、鎂離子及重金屬離子締合成沉淀
會(huì)抑制某些生物化學(xué)過程

Tris緩沖液
Tris緩沖液是在生物化學(xué)研究中使用較廣泛的一種緩沖劑，其本身為弱堿，常用有效pH在“中性”范圍，Tris-HCl緩沖液：pH＝7.5～8.5；Tris-磷酸鹽緩沖液：pH＝5.0～9.0。
Tris-HCl緩沖液優(yōu)點(diǎn)
堿性較強(qiáng)，可以只用這一種緩沖液配置由酸到堿的但范圍pH緩沖液；
對(duì)生物化學(xué)過程干擾很小，不與鈣、鎂離子及重金屬離子發(fā)生沉淀。
Tris-HCl緩沖液缺點(diǎn)
pH受濃度影響較大，稀釋10倍，pH變化大于0.1
溫度效應(yīng)大，如4℃時(shí)pH=8.4，37℃時(shí)pH=7.4
易吸收空氣中的二氧化碳
對(duì)某些pH電極有一定干擾作用，要使用與Tris溶液具有兼容性的電極
除了Tris-HCl之外，tris還有多種衍生緩沖液：
TBS=Tris-HCl+ NaCl+KCl，常用于清洗免疫染色的組織或Western Blotting中的蛋白印跡膜等；
TBST=Tris-HCl+NaCl+tween20，做Western Blotting中常用的一種洗膜緩沖液；
TE=Tris-HCl+EDTA，對(duì)DNA的堿基有保護(hù)性，常被用于DNA的穩(wěn)定和儲(chǔ)存；
TAE=Tris base+乙酸+EDTA，是大片段DNA短時(shí)間電泳時(shí)廣泛使用的緩沖系統(tǒng)；
TBE=Trisbase+硼酸+EDTA，適用于長時(shí)間DNA電泳，對(duì)較小片段分離效果較好。

甘氨酸緩沖液
甘氨酸緩沖液pH范圍較寬，使用范圍較廣，可用pH2.0~11.0，最常用體系和pH范圍如下圖所示：

氨基酸緩沖液優(yōu)點(diǎn)：
為細(xì)胞組份和各種提取液提供更接近的天然環(huán)境。
氨基酸緩沖液缺點(diǎn)：
與磷酸鹽緩沖體系相似，也會(huì)干擾某些生物化學(xué)反應(yīng)過程，如代謝過程等；并且試劑價(jià)格較高。
HEPES緩沖溶液
HEPES是一種非離子兩性緩沖液，其在pH7.2~7.4范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力，常用在生化診斷試劑盒、DNA/RNA提取試劑盒及PCR診斷試劑盒里。
HEPES緩沖液優(yōu)點(diǎn)：
在開放式培養(yǎng)或細(xì)胞觀察時(shí)能維持較恒定的pH值，并對(duì)細(xì)胞無毒性作用。
HEPES緩沖液缺點(diǎn)：
在高濃度時(shí)對(duì)一些細(xì)胞可能有毒，與其他緩沖劑相比價(jià)格略貴。
說了半天，你可能覺得我還是不知道怎么選，大家可以去蘇州亞科的官網(wǎng)www.yacoo.com.cn了解下，或者請(qǐng)看下圖：
選擇緩沖液的一般原則
重中之重，先確定你的體系所需要的pH值；
選擇緩沖體系，其解離常數(shù)pKa值應(yīng)該在設(shè)定的pH上下一個(gè)pH值單位內(nèi)，因?yàn)榫彌_液的pKa變化超過一個(gè)pH單位時(shí)，其緩沖能力就會(huì)明顯下降；
緩沖體系不應(yīng)影響蛋白質(zhì)的活性或者DNA的穩(wěn)定性，并避免其他離子的干擾；
最后，還要考慮溫度的影響：溫度不僅對(duì)緩沖液有影響，對(duì)細(xì)胞也有影響，大多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞在37℃的生理狀況下pH為7.0~7.5，而在溫度下降到0℃時(shí)可達(dá)到8.0。
最后，綜合考慮各項(xiàng)因素，為你實(shí)驗(yàn)的寶寶們選擇一個(gè)合適的緩沖體系吧！

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