辛基-瓊脂糖凝膠4FF的使用方法及注意事項(xiàng)

    ——上海遠(yuǎn)慕生物詳述！

    產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
    辛基-瓊脂糖凝膠4FF是將辛基鍵合在瓊脂糖凝膠上形成的一種可利用疏水作用來(lái)實(shí)現(xiàn)目標(biāo)產(chǎn)品純化分離的中等疏水類介質(zhì)。適合各種蛋白的分離和純化。具有流速快，使用方便，應(yīng)用廣泛的特點(diǎn)。

    產(chǎn)品參數(shù)：
    產(chǎn)品名稱：辛基-瓊脂糖凝膠4FF(Octyl-Sepharose4FF)
    基質(zhì)：6%交聯(lián)瓊脂糖凝膠
    配基：正丁烷基n-Octyl
    配基密度：5μmol/mL
    顆粒大小：45-165μm
    最大流速：600cm/h
    工作pH：3-13
    操作溫度：室溫
    使用說(shuō)明：辛基-瓊脂糖凝膠4FF是一種中等疏水層析介質(zhì)，適合各種蛋白的分離和純化。

    使用方法：
    1.裝柱：
    （1）將所有的試劑和填料達(dá)到室溫.配制初始緩沖液(平衡液)和緩沖液。
    （2）根據(jù)柱子大小取所需凝膠的量，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始緩沖液（按凝膠：緩沖液=3:1比例）配成勻漿。
    （3）將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤(rùn)濕并保持一小段液體（液面略高于濾膜），務(wù)必使底端無(wú)氣泡。
    （4）用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意不要使用氣泡。打開(kāi)柱子出液口，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭。
    （5）打開(kāi)蠕動(dòng)泵，讓緩沖液用使用時(shí)流速的1.33倍的流速流過(guò)，使柱床穩(wěn)定。用2-3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。

    2.平衡：
    讓平衡緩沖液以一定流速流過(guò)柱子，到流出液電導(dǎo)和pH不變。平衡緩沖液一般是高鹽濃度的緩沖液，如：0.02-0.05mol/L的PBS加1-2.5mol/L(NH4)2SO4等。
    3.上樣：
    （1）樣品用平衡液配制，渾濁的樣品要離心、過(guò)濾后上柱；
    （2）一般情況是讓目標(biāo)產(chǎn)品結(jié)合在柱子上，用平衡洗液洗去雜質(zhì)，再選擇一種洗脫液洗下目標(biāo)產(chǎn)品。
    （3）介質(zhì)對(duì)樣品組分吸附的程度取決于樣品的疏水性質(zhì)、流動(dòng)相的離子強(qiáng)度和溫度。溫度越大、鹽濃度越高或樣品組分疏水性越強(qiáng)，介質(zhì)對(duì)組分吸附越牢。
    4.洗脫：
    疏水介質(zhì)可用減小鹽濃度進(jìn)行洗脫。加表面活性劑或者有機(jī)溶劑可加強(qiáng)洗脫。最常用的洗脫液是低鹽濃度緩沖液，如：0.02-0.05mol/L的PBS。
    5.再生：
    一般用低鹽濃度的緩沖液洗，洗10倍以上柱體積，接著用結(jié)合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。若有失活的蛋白或者脂類物質(zhì)在再生時(shí)洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。

    6.在位清洗：
    （1）對(duì)于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白，可以用2MNaCl去除。
    （2）對(duì)沉淀蛋白、以疏水作用結(jié)合的蛋白或者脂類物質(zhì)，可用1MNaOH去除。
    （3）對(duì)強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白、脂類等，可用4-10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，但要注意有機(jī)溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產(chǎn)生氣泡。
    （4）清洗完畢后，用至少3倍柱體積緩沖液平衡柱子。
    7.去熱源：
    用0.5M的氫氧化鈉清洗柱子5-6小時(shí)或者用0.1M的氫氧化鈉24小時(shí)?；蛴靡韵虏襟E去除：
    （1）2倍柱體積的70%的乙醇；
    （2）2倍柱體積50MmTris-HcLPh7.5
    （3）1倍柱體積4M尿素
    （4）3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1MNaCl;
    以上緩沖液都在無(wú)熱源的雙蒸水中配制。
    8.消毒：
    用0.5-1.0MNaOH室溫下洗8-10倍柱體積，初始緩沖液平衡柱子。

    注意事項(xiàng)：
    （1）密封貯存于4°C-28°C（保存溶液為20%乙醇+0.1M醋酸鈉），通風(fēng)、干燥的地方，不能冷凍。用過(guò)的柱子貯存于4°C（20%乙醇）。
    （2）在裝柱、使用和保存柱子的時(shí)候，要避免柱子流干，氣泡進(jìn)入。