人抗浦肯野細(xì)胞抗體/抗Yo抗體(PCA-1/Yo)ELISA試劑盒說明書

產(chǎn)品名稱：人抗浦肯野細(xì)胞抗體/抗Yo抗體(PCA-1/Yo)Elisa試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：48T/96T
檢測方法：酶聯(lián)免疫法/酶免法（ELISA）
用途：科研實驗，不能用于臨床應(yīng)用

實驗原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人抗浦肯野細(xì)胞抗體/抗Yo抗體(PCA-1/Yo)表達(dá)。將目標(biāo)抗體包被于96孔微孔板中，制成固相載體，向微孔中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)本，其中的目標(biāo)連接于固相載體上的抗體結(jié)合，然后加入微生物化的目標(biāo)抗體，將未結(jié)合的生物素抗體洗凈后，加入HRP標(biāo)記和親和素，再次徹底洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的目標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（O.D.值），計算樣品濃度。

試劑盒組成
1    30倍濃縮洗滌液    20ml×1瓶    7    終止液    6ml×1瓶
2    酶標(biāo)試劑    6ml×1瓶    8    陽性對照    0.5ml×1瓶
3    酶標(biāo)包被板    12孔×8條    9    陰性對照    0.5ml×1瓶
4    樣品稀釋液    6ml×1瓶    10    說明書    1份
5    顯色劑A液    6ml×1瓶    11    封板膜    2張
6    顯色劑B液    6ml×1/瓶    12    密封袋    1個

標(biāo)本要求
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

實驗所需自備試驗器材
1. 酶標(biāo)儀（450nm）
2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
4. 蒸餾水或去離子水

試劑盒操作步驟
A.編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號，每板應(yīng)設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）
B.加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，
C.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
D.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
E.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
F.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
G.溫育：操作同3。
H.洗滌：操作同5。
I.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。
J.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
K.測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

計算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，
即為樣品的實際濃度。

注意事項
1.試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
2.實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
3.不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
4.使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5.使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6.洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
7.底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
8.加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
9.按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
10．試劑盒保存：；2-8℃。
11．有效期：6個月